吉姆薩染液由天青,伊紅組成。染色原理和結(jié)果與瑞特染色法基本相同。但本法對(duì)細(xì)胞核和寄生蟲(chóng)著色較好,結(jié)構(gòu)顯示更清晰,而胞質(zhì)和中性顆粒則著色較差。
基本方案
實(shí)驗(yàn)材料
原位雜交玻片
試劑、試劑盒
吉姆薩染色液磷酸鈉緩沖液乙醇二甲苯
儀器、耗材
染色盤(pán)培養(yǎng)箱濾紙
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 將顯影的玻片置于玻片架上,浸入盛有水的染色盤(pán)中。
(1)1個(gè)盤(pán):pH6.8 10 mmol/l 磷酸鈉緩沖液,所配的25倍稀釋的吉姆薩染液。
(2)3個(gè)盤(pán):水。
(3)脫水系列溶液:
①3個(gè)盤(pán):分別盛50%、70%和95%乙醇。
②2個(gè)盤(pán):盛有100%乙醇。
③3個(gè)盤(pán):盛有二甲苯。
3. 在25倍稀釋的吉姆薩染液中染玻片20 s(依染色時(shí)間決定染色的強(qiáng)弱),將玻片在水中浸泡3次,每次2 min。
4. 連續(xù)用乙醇脫水系列溶液處理,每盤(pán)中浸泡2 min,將玻片移至二甲苯盤(pán)中,毎次浸泡2 min,共3次。
5. 在通風(fēng)櫥中,按如下操作壓片固定:用一平頭鑷(拿在左手),從二甲苯中取出一塊玻片,夾住磨面端置水平。加4滴Permount 的于另一端(切片所處位置),左手拿一干凈的蓋玻片,很緩慢地放在載玻片上(在加壓片固定介質(zhì)和蓋玻片前,勿使玻片變干,因微小氣泡會(huì)造成人為假象)。
6. 用3MM 濾紙,沿蓋玻片邊緣,小心吸去多余固片介質(zhì)/二甲苯,并擦拭載玻片背面(勿擦拭蓋玻片)。
7. 將玻片平放于一硬紙盒盤(pán)上,置42℃溫孵箱2天使之凝固。
8. 以剃須刀片小心刮去載玻片背面殘留膠乳,染料及固片介質(zhì)。用鏡頭紙或普通棉紙擦去塵埃。放入玻片盒,必要時(shí),載玻片上再注明標(biāo)簽。
9. 顯微鏡觀察玻片,觀察時(shí)可依信號(hào)強(qiáng)弱,調(diào)節(jié)光亮。
注意事項(xiàng)
1. 勿將玻片直立存放于玻片中,因此時(shí)固片介質(zhì)尚未凝結(jié)。
來(lái)源:丁香通
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