進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物灌流是獲得良好的形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果以及保存腦、腎、心臟和其他許多器官所必需的。對(duì)于未經(jīng)訓(xùn)練的實(shí)驗(yàn)人員,初次進(jìn)行灌流可能會(huì)失敗,故建議首先用一些對(duì)照實(shí)驗(yàn)動(dòng)物練習(xí),以熟悉此過(guò)程。
基本方案
實(shí)驗(yàn)材料
小鼠
試劑、試劑盒
PBS
儀器、耗材
23-G針頭注射管解剖器械
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 一支針管吸滿1×PBS,另一支吸4%PFA固定液(4℃),擱置待用。
2. 在袋中用CO2氣體處死小鼠。停止吸呼后,立刻背朝下放平小鼠,小心剖開胸腔防止過(guò)多出血,小心并迅速切開肋骨,剪去橫隔膜,暴露心臟。
3. 小心將吸有1×PBS的針管刺入左心室,剖開右心室排液。緩慢但持續(xù)將1×PBS灌入心臟(見(jiàn)圖一、如灌流正常,血液豐富器官,如肝臟,脾臟和腎臟將轉(zhuǎn)呈灰白色)。
4. 當(dāng)多數(shù)血液已流出后,撥去1×PBS的針管將吸有4%PFA固定液的針管插入左心室同一進(jìn)針處,以20 ml 固定液緩慢灌流小鼠。
5. 灌流后,剖下器官或組織,放入盛有4%PFA固定液的做好標(biāo)記玻璃瓶中,于冰上保存。
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