實(shí)驗(yàn)周期:4-6 weeks
建模方法:
建模方式:SPF小鼠,適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,采用鼻腔滴入LPS加熏香煙的方法建立COPD小鼠動(dòng)物模型分別于第1、29經(jīng)鼻腔滴入LPS(30μg/6μL),第2-30天(除第29天)采取熏香煙法,將小鼠放入自制的玻璃熏箱,10支/次,30min/次,5d/周,共4周。
模型評(píng)價(jià)
一般觀察:一般情況空白對(duì)照組小鼠無(wú)死亡,毛發(fā)光澤,呼吸均勻,活動(dòng)正常;模型對(duì)照組小鼠毛發(fā)無(wú)光澤,部分有脫毛現(xiàn)象,躁動(dòng),熏煙時(shí)喜扎堆,倦怠蜷縮,汗出,腹部脹大,呼吸急促,出現(xiàn)點(diǎn)頭運(yùn)動(dòng),甚者張口呼吸明顯。
小鼠肺功能檢測(cè)看小鼠氣道阻力、動(dòng)態(tài)肺順應(yīng)性、最大呼氣流量、吸氣時(shí)間、呼氣時(shí)間、
組織病理學(xué)
肺組織形態(tài)學(xué)檢測(cè):
腹腔麻醉小鼠后,開(kāi)胸暴露胸腔:取左側(cè)肺葉固定于10%甲醛溶液24h,常規(guī)脫水石蠟包埋,切片行HE染色,光鏡下觀察。
空白對(duì)照組小鼠肺泡結(jié)構(gòu)清晰,肺泡大小均勻,氣道黏膜上皮結(jié)構(gòu)完整,纖毛排列整齊;模型對(duì)照組小鼠部分肺泡壁塌陷,肺泡不規(guī)則擴(kuò)大并相互融合,形成肺大泡,肺間質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)不同程度的炎性細(xì)胞浸潤(rùn),支氣管黏膜上皮脫落,黏膜皺襞增多,突入管腔,纖毛黏縮,管腔變窄,符合COPD病理改變。
標(biāo)志因子水平
TNF alpha、Il-18檢測(cè):
最后一次煙熏完后24小時(shí)內(nèi)處死,按0.05mL/10g)腹腔麻醉小鼠,將小鼠腹主動(dòng)脈取血法取血1mL,室溫下放置2h后,2 000r/min離心20min,取血清,-20℃保存?zhèn)溆谩0碋LISA試劑盒操作步驟說(shuō)明檢測(cè)小鼠血清中TNFalpha、
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