細(xì)胞培養(yǎng)是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境(無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等),使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)是伊萊博生物的基礎(chǔ)服務(wù)項(xiàng)目之一。
細(xì)胞培養(yǎng)服務(wù)也叫細(xì)胞克隆技術(shù),在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對(duì)于整個(gè)生物工程技術(shù),還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說,細(xì)胞培養(yǎng)都是一個(gè)*的過程,細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)模克隆。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞,這是克隆技術(shù)*的環(huán)節(jié),而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。通過細(xì)胞培養(yǎng)得到大量的細(xì)胞或其代謝產(chǎn)物。因?yàn)樯锂a(chǎn)品都是從細(xì)胞得來,所以可以說細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是生物技術(shù)中核心、基礎(chǔ)的技術(shù)。
一、復(fù)蘇
1、把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動(dòng)。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺(tái)里。
2、把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來),1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
3、把上清液倒掉,加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動(dòng),使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。
4、標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等,放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。
5、3天換一次培養(yǎng)基。
二、傳代
1、培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時(shí)要傳代。
2、把原有培養(yǎng)基吸掉。
3、加適當(dāng)?shù)囊鹊癰酶(能覆蓋細(xì)胞就行),消化1-2分鐘。
4、細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
5、用移液槍吹打細(xì)胞,把細(xì)胞都懸浮起來。
6、把細(xì)胞吸到15ml的離心管中,1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
7、倒掉上清液,加1-2ml培養(yǎng)基,把細(xì)胞都吹起來。
8、根據(jù)細(xì)胞種類把細(xì)胞傳到幾個(gè)培養(yǎng)皿中。一般,癌細(xì)胞分5個(gè),正常細(xì)胞傳3個(gè)。繼續(xù)培養(yǎng)。
三、凍存
把細(xì)胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細(xì)胞種類,凍存日期。4℃30min,-20℃30min,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存。
凍存液的配制:70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。