1. 10-12周齡雌性SD大鼠,皮下注射孕馬血清促性腺激素(Pregnant Mare Serum Gonadotropin,PMSG) 60IU,48h后頸椎脫臼處死。
2. 大鼠浸入75%乙醇浸泡5-10分鐘,轉(zhuǎn)移到通風(fēng)柜中的解剖盤中。
3. 在距離大鼠脊柱1cm、肋下1cm的交叉位置剪開皮膚、肌肉,可見白色的脂肪組織,拉出脂肪組織,可見到粉紅色的卵巢,摘除卵巢。
4. 取卵巢放入預(yù)冷的含雙抗的緩沖液中,用緩沖液清洗卵巢三次,去除周圍組織及表面包膜。
5. 在解剖顯微鏡下用1mL的注射器刺破卵泡,釋放顆粒細(xì)胞。
6. 將懸液通過(guò)70μm篩網(wǎng)過(guò)濾至50ml離心管中,之后200g,離心7min。
7. 計(jì)數(shù),種植到24孔板和大皿中。
8. FSHR表達(dá)鑒定顆粒細(xì)胞。
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