HE染色實(shí)驗(yàn),全稱為蘇木精和伊紅染色方法,是病理學(xué)染色技術(shù)中最基本也是最重要的一種。該方法通過(guò)區(qū)分細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的酸堿性特性,將它們分別染成藍(lán)色和紅色,從而滿足形態(tài)學(xué)觀察的需求。
蘇木精為堿性天然染料,可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA,DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。
細(xì)胞漿內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì),為兩性化合物。細(xì)胞漿的染色與pH值有密切關(guān)系。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料,在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子,與蛋白質(zhì)的氨基正電荷(陽(yáng)離子)結(jié)合而使細(xì)胞漿染色,細(xì)胞漿、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織,嗜伊紅顆料等被感染成不同程度的紅色或粉紅色,與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明的對(duì)比。
1、切片制備
切片厚度大?。呵衅暮穸群痛笮?huì)影響染色效果,因此需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的切片。
固定清洗:將切片放入固定液中以防止組織中的水分蒸發(fā),并保持組織結(jié)構(gòu)的完整性。常用的固定液包括甲醛、乙醇等。之后用清水清洗切片,去除固定液的影響。
2、固定清洗
樣品制備:對(duì)于貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,胰酶消化后調(diào)整細(xì)胞濃度滴加于蓋玻片上,培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間后取出并用PBS洗滌。
樣品固定:用95%乙醇固定20分鐘,再用PBS洗滌兩次。
3、染色沖洗
染核:用蘇木素染液染色2-3分鐘,之后用自來(lái)水沖洗。若染色過(guò)深,可用1%鹽酸酒精溶液分色,再水洗。
染胞質(zhì):浸入伊紅染液染色1分鐘,再次用自來(lái)水沖洗。
4、封固觀察
封固:吹干或自然晾干細(xì)胞爬片后,使用中性樹(shù)膠封片。
鏡檢觀察:在顯微鏡下觀察染色效果。若染色不均勻或顏色不鮮明,可能需要調(diào)整染色時(shí)間和分化時(shí)間。