HE染色實(shí)驗(yàn)是生物醫(yī)學(xué)中常用的一種染色技術(shù),尤其在病理學(xué)、組織學(xué)和胚胎學(xué)等領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用。其HE染色通過利用蘇木精和伊紅兩種染料的酸堿性質(zhì),將組織切片中的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)分別染成藍(lán)色和紅色,從而清晰地顯示出組織或細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。蘇木精是一種堿性染料,能將細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)和胞質(zhì)內(nèi)的核酸染成藍(lán)紫色;而伊紅是一種酸性染料,能使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分染成紅色。這種染色方法不僅簡單易行,而且染色效果穩(wěn)定,適用于各種固定液固定的材料,染色后不易褪色,可長期保存。
1、樣品制備
固定:對于貼壁生長細(xì)胞,胰酶消化后調(diào)整細(xì)胞濃度并滴加于蓋玻片上,培養(yǎng)相應(yīng)時間后取出細(xì)胞爬片,用PBS洗滌。
固定液處理:使用95%乙醇固定20分鐘,然后用PBS洗滌。
2、蘇木素染細(xì)胞核
染色:切片入Harris蘇木素染液中染色3-8分鐘,自來水洗,1%的鹽酸酒精分化數(shù)秒,自來水沖洗,0.6%氨水返藍(lán),流水沖洗。
分色:若細(xì)胞核染色過深,用1%鹽酸酒精溶液分色數(shù)秒,自來水洗滌。
3、伊紅染細(xì)胞質(zhì)
染色:切片入伊紅染液中染色1-3分鐘。
4、脫水封片
脫水:將切片依次放入95%酒精I(xiàn) 5分鐘-95%酒精I(xiàn)I 5分鐘-無水乙醇Ⅰ5分鐘-無水乙醇Ⅱ5分鐘-二甲苯Ⅰ5分鐘-二甲苯Ⅱ5分鐘中脫水透明,從二甲苯拿出來稍晾干。
封片:中性樹膠封片。
5、顯微鏡鏡檢
圖像采集分析:在顯微鏡下觀察染色結(jié)果,并進(jìn)行圖像采集和分析。