我司已成功分離并培養(yǎng)E15天胎鼠脊髓神經(jīng)元的原代細胞培養(yǎng),并對細胞平臺的人員進行培訓。
培訓地點:會議室、細胞房
參與培訓人員:細胞房技術人員
首先在會議室先講解以下基礎操作步驟
(1)75% (體積分數(shù))酒精消毒孕鼠,在無菌條件下取出胎鼠,分離并切取脊髓,置于冷的無鈣、鎂的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。
(2)解剖顯微鏡無菌條件下仔細剝離脊膜及血管。
(3)用彈簧剪將脊髓剪成1cm3大小,消化液37℃消化15-20min,每五分鐘振蕩一次;
(4)去掉上清,加入終止液終止消化,吹打10-15次,不能有氣泡,收集上清,剩余組織再消化一次。
(5)4℃1000rpm離心10min,棄上清,加入種植液1重懸,培養(yǎng)箱內差速貼壁30min;
(6)收集上清,臺盼藍染色計數(shù),按6*105cells/孔種入六孔板(種植液1),37℃,5%CO2,95%飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
(7)培養(yǎng)第二天,全換液更換為種植液2;
(8)培養(yǎng)第四天,半量換液加入5uM的阿糖胞苷,24h全量換液;
(9)之后每周換液兩次。
之后并在細胞房代領細胞平臺所有技術人員進行實練操作。后續(xù)并將組織細胞平臺的每位技術人員將此技術熟練操作。