HE染色實驗簡稱HE染色法,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一。蘇木精染液為堿性,主要使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍色;伊紅為酸性染料,主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色。HE染色法是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中zui基本、使用zui廣泛的技術(shù)方法。
HE染色實驗步驟:一般包含取材固定,脫水透明,浸蠟包埋,切片與貼片,脫蠟染色,脫水透明,封固等步驟。
1、染色時調(diào)節(jié)pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長,組織酸化而影響細胞核著色。因此,要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸水溶液中處理10-30min,這樣可以使細胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳,可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
2、切片染蘇木精后,分色這一步是關(guān)鍵,應(yīng)在顯微鏡下控制進行,一般以細胞核染色清楚(晰)而細胞質(zhì)基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導(dǎo)致染色太淺,應(yīng)重新染色后再行分色。
3、切片經(jīng)酒精脫水后,入二甲苯時可出現(xiàn)白色不透明狀態(tài),此為脫水不*,應(yīng)將切片退回*,更換酒精、二甲苯,以求*脫水與透明。
4、在染色過程中不要讓切片干燥,以免切片收縮、變形,影響神經(jīng)元形態(tài)。
5、切片從二甲苯取出或進入二甲苯前,切片周邊均應(yīng)擦干凈或吸干多余水分。
6、zui后封固時,要用中性樹脂,防止日后褪色,蓋片要選大于組織塊的面積,如漏出一部分不久將會褪色,所用樹脂濃度要適當(dāng),樹脂封固時不能有氣泡。