1.組織4℃條件下從醫(yī)院取回。
2.消毒取樣的15ml管,取出組織,放到10ml大皿中。
3.用含4抗的PBS溶液浸泡,清洗組織。
4.再用組織緩沖液浸泡、清洗三遍。
5.將組織剪成1mm3大小的組織塊,轉(zhuǎn)移到15ml管中消化。
6.在37℃水浴鍋中,消化15min。
7.取少量液體在顯微鏡下觀察,看到較多的單細(xì)胞和較少的細(xì)胞簇后,終止消化。
8.用100μm篩過濾,然后300g4℃離心5min,移去上清。
9.重懸沉淀,轉(zhuǎn)移到2ml離心管中,300g4℃離心5min,移去上清。
10.估算沉淀的細(xì)胞量,以1:25的比例添加基質(zhì)膠,重懸。
11.24孔板鋪板,冰上操作,每孔點(diǎn)膠25ul。
12.鋪板后,放到37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中15min成膠。
13.然后每孔添加600ul 結(jié)直腸癌類器官培養(yǎng)基,放到37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中。
本次會議,提升公司對結(jié)直腸癌類器官原代培養(yǎng)的重要知識點(diǎn)的認(rèn)知
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