簡要描述:TTC染色原理:TTC(2,3,5—氯化三苯基四氮唑)是脂溶性光敏感復合物,它是呼吸鏈中吡啶—核苷結構酶系統(tǒng)的質子受體,與正常組織中的脫氫酶反應而呈紅色,而缺血組織內脫氫酶活性下降,不能反應,故不會產生變化呈蒼白。
詳細介紹
一、TTC染色原理:TTC(2,3,5—氯化三苯基四氮唑)是脂溶性光敏感復合物,它是呼吸鏈中吡啶—核苷結構酶系統(tǒng)的質子受體,與正常組織中的脫氫酶反應而呈紅色,而缺血組織內脫氫酶活性下降,不能反應,故不會產生變化呈蒼白。
二、新鮮組織切片制備及染色實驗步驟:
1、取材:動物麻醉后立即取新鮮組織(如腦、心臟) ,不經固定液固定,將組織直接放入-200速凍20-30min,如果不急用,可以暫時放置-80°C凍存。
2、組織塊切片:將凍好的組織稍解凍,用萊卡刀片手動切片,厚度2-3mm為宜,切面整齊。
3、TTC染色:將切片放入提前預熱好的的TTC孵育液中,放入37C水浴鍋中避光孵育15-30min,間隔5-8min輕輕搖動組織,使其均勻接觸到染色液,并觀察染色結果。
4、拍照:組織成色后,加入固定液終止反應,并避光保存組織, 照相機拍照。
三、TTC染色判讀:
組織正常區(qū)呈紅色,梗死區(qū)呈蒼白色。
四、注意事項:
1、標本越新鮮越好,勿固定,刀片宜薄而鋒利, 在冰箱中速東的時間以能順利切片為宜,保持切片平整。
2、染色后的標本浸存于國定液中避光保存,染色結果能保存數(shù)月 ,在陽光下易褪色;
3、TTC染色波避光4°C可保存一個月,使用前先復常溫。
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