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簡(jiǎn)要描述:細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù):細(xì)胞生命學(xué)在生命科學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重要作用日益受到國(guó)內(nèi)外學(xué)術(shù)界的高度重視,已成為具有領(lǐng)頭效應(yīng),進(jìn)展極為迅速的學(xué)科。
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一、細(xì)胞培養(yǎng)
1取材 在無菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞(視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?,?jīng)過的處理(如消化分散細(xì)胞、分離等)后接入培養(yǎng)器血中,這一過程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無取材這一過程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。2培養(yǎng) 將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。3凍存及復(fù)蘇(可參閱后面有關(guān)章節(jié))為了保存細(xì)胞,特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株,要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃,將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養(yǎng)基,以的冷卻速度凍存,終保存于液氮中。在極低的溫度下,細(xì)胞保存的時(shí)間是無限的。復(fù)蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37℃水中,使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。
二、原代細(xì)胞分離
凡是來源于胚胎、組織器官及外周血,經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細(xì)胞稱之為原代細(xì)胞。1懸浮細(xì)胞的分離方法組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,簡(jiǎn)單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。2實(shí)體組織材料的分離方法對(duì)于實(shí)體組織材料,由于細(xì)胞間結(jié)合緊密,為了使組織中的細(xì)胞充分分散,形成細(xì)胞懸液,可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。
三、細(xì)胞增殖檢測(cè)技術(shù)
目前主要有兩種用于檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的方法。一種是直接的方法,通過直接測(cè)定進(jìn)行分裂
的細(xì)胞數(shù)來評(píng)價(jià)細(xì)胞的增殖能力。另一種是間接的方法,即細(xì)胞活力(cell viability)檢測(cè)方法,通過檢測(cè)樣品中健康細(xì)胞的數(shù)目來評(píng)價(jià)細(xì)胞的增殖能力。
其中常見檢測(cè):CCK8檢測(cè)法 ,MTT檢測(cè)法,Brdu檢測(cè)法,Edu檢測(cè)法,平板克隆形成。
常用的方法:流式檢測(cè)細(xì)胞周期,標(biāo)記有絲分裂百分率法。
四、細(xì)胞凋亡檢測(cè)
常見檢測(cè)方法:流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡,線粒體膜電位,活性氧檢測(cè),Hoechst染色,電鏡,TUNEL。
五、細(xì)胞周期檢測(cè)技術(shù)
細(xì)胞周期指由細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次細(xì)胞分裂結(jié)束所經(jīng)歷的過程,所需的時(shí)間叫細(xì)胞周期時(shí)間。
六、細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力檢測(cè)
常見檢測(cè)方法:細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn),Transwell實(shí)驗(yàn),Invasion實(shí)驗(yàn)
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