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WB蛋白免疫印跡技術(shù)

簡要描述:WB蛋白免疫印跡技術(shù)是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上,然后利用抗體來進(jìn)行檢測的一種方法。該種技術(shù)可以同時(shí)比較多個(gè)樣品同種蛋白的表達(dá)量差異。

  • 更新時(shí)間:2022-12-22
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詳細(xì)介紹

WB免疫印跡( Western Blot)是將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上,然后利用抗體進(jìn)行檢測的方法。對已知表達(dá)蛋白可用相應(yīng)抗體作為一抗進(jìn)行檢測,對新基因的表達(dá)產(chǎn)物,可通過融合部分的抗體檢測。
與Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質(zhì),“探針”是抗體,“顯色”用標(biāo)記的二抗。
經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)。再與酶或同位素標(biāo)記的第抗體起反應(yīng), 經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。

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