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簡(jiǎn)要描述:細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)包括MTT實(shí)驗(yàn)、CCK-8實(shí)驗(yàn)、平板克隆、劃痕實(shí)驗(yàn)等,由達(dá)為科生物細(xì)胞平臺(tái)的實(shí)驗(yàn)人員操作完成。細(xì)胞平臺(tái)所有實(shí)驗(yàn)員均有豐富的實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn),熟練的操作技術(shù)。
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細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征,單細(xì)胞生物以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的個(gè)體,多細(xì)胞生物以細(xì)胞分裂的方式產(chǎn)生新的細(xì)胞,用來(lái)補(bǔ)充體內(nèi)衰老和死亡的細(xì)胞。
CCK-8常應(yīng)用于檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力。CCK-8試劑中含有WST–8:化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪*(1-Methoxy PMS)的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物(Formazan)。生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比,用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度值(OD值)來(lái)判斷活細(xì)胞數(shù)量,OD值越大,細(xì)胞活性越強(qiáng)(如果是測(cè)藥物毒性,則表示藥物毒性越?。?/p>
MTT常應(yīng)用于檢測(cè)細(xì)胞的增殖能力,其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan),并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲瓚,用酶標(biāo)儀在490nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度值(OD值),在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。根據(jù)測(cè)得的吸光度值(OD值)來(lái)判斷活細(xì)胞數(shù)量,OD值越大,細(xì)胞活性越強(qiáng)(如果是測(cè)藥物毒性,則表示藥物毒性越小)。
單個(gè)細(xì)胞在體外增殖6代以上(時(shí)間約1周以上),其后代所形成的細(xì)胞群體,稱為集落或克隆。每個(gè)克隆含有50個(gè)以上的細(xì)胞,大小在0.3-1.0mm之間。細(xì)胞接種存活率只表示接種細(xì)胞后貼壁的細(xì)胞數(shù),但貼壁后的細(xì)胞不一定每個(gè)都能增殖并形成克隆。只有同時(shí)具有貼壁和增殖活力的細(xì)胞才會(huì)形成克隆。
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