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簡(jiǎn)要描述:細(xì)胞周期檢測(cè)技術(shù)服務(wù)是達(dá)為科生物的基礎(chǔ)服務(wù)項(xiàng)目之一,由細(xì)胞平臺(tái)經(jīng)驗(yàn)豐富的實(shí)驗(yàn)人員操作完成。
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細(xì)胞周期指細(xì)胞一個(gè)世代所經(jīng)歷的時(shí)間。從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個(gè)周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。
細(xì)胞周期測(cè)定可以:(1)作為生物相容性評(píng)價(jià)指標(biāo);(2)用于研究細(xì)胞凋亡;(3)作為選擇細(xì)胞的依據(jù)。
流式細(xì)胞儀的工作原理是將待測(cè)細(xì)胞放入樣品管中,在氣體的壓力下進(jìn)入充滿(mǎn)鞘液的流動(dòng)室。在鞘液的約束下細(xì)胞排成單列由流動(dòng)室的噴嘴噴出,形成細(xì)胞柱。通過(guò)對(duì)流動(dòng)液體中排列成單列的細(xì)胞進(jìn)行逐個(gè)檢測(cè),得到該細(xì)胞的光散射和熒光指標(biāo),分析出其體積、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、DNA、RNA、蛋白質(zhì)、抗原等物理及化學(xué)特征。
細(xì)胞內(nèi)的DNA含量隨細(xì)胞周期進(jìn)程發(fā)生周期性變化,如G0/G1期的DNA含量為2C,而G2期的DNA含量是4C。碘化丙啶( Propidium,簡(jiǎn)稱(chēng)PI)是一種雙鏈DNA的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光,并且熒光強(qiáng)度和雙鏈DNA的含量成正比。假定G0和G1期的細(xì)胞熒光強(qiáng)度為1,那么G2和M期的細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為2,S期的細(xì)胞介于1和2之間。細(xì)胞凋亡時(shí),由于細(xì)胞核皺縮和DNA的片段化,染色時(shí)DNA的片段會(huì)從打孔的細(xì)胞膜處丟失,流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí),熒光強(qiáng)度小于1,即Sub-G1峰或者凋亡細(xì)胞峰。
細(xì)胞內(nèi)的DNA被碘化丙啶染色后,可以用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)行DNA含量測(cè)定,然后根據(jù)DNA含量的分布情況,可分析細(xì)胞周期各時(shí)相的百分比。
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