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細胞免疫組化技術(shù)服務(wù)

簡要描述:細胞免疫組化技術(shù)服務(wù)是達為科生物的基礎(chǔ)服務(wù)項目之一,由細胞平臺經(jīng)驗豐富的實驗人員操作完成。

  • 更新時間:2022-12-23
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詳細介紹

免疫組化(Immunohistochemistry,IHC)是利用抗原抗體反應(yīng),即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學反應(yīng)使標記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對其進行定位、定性及定量的研究。

*,抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性,即先將組織或細胞中的某些化學物質(zhì)提取出來,以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實驗動物,制備特異性抗體,再用這種抗體(一抗)作為抗原去免疫動物制備第二抗體,并用某種酶(常用辣根過氧化物酶)或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合,將抗原放大,由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復合物是無色的,因此,還必須借助于組織化學方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來(常用顯色劑 DAB顯示為棕黃色顆粒)。通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),顯示細胞或組織中的化學成分,在顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物,從而能夠在細胞或組織原位確定某些化學成分的分布、含量。組織或細胞中凡是能作抗原或半抗原的物質(zhì),如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進行檢測。

免疫組化實驗所用標本主要有組織標本和細胞標本兩大類,前者包括石蠟切片(病理切片和組織芯片)和冰凍切片,后者包括組織印片、細胞爬片和細胞涂片。其中石蠟切片是制作組織標本常用、基本的方法,對于組織形態(tài)保存好,且能作連續(xù)切片,有利于各種染色對照觀察;還能長期存檔,供回顧性研究;石蠟切片制作過程對組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,但可進行抗原修復,是免疫組化中較好的組織標本制作方法。

免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體,單克隆抗體是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體,應(yīng)用細胞融合雜交瘤技術(shù)免疫動物制備。多克隆抗體是將純化后的抗原直接免疫動物后,從動物血中所獲得的免疫血清,是多個B淋巴細胞克隆所產(chǎn)生的抗體混合物。

免疫組化是一個既簡單又復雜的實驗技術(shù):原理很簡單,但是結(jié)果受很多因素如固定時間、固定劑的選擇、抗原修復方法等影響。所以,要想得到高質(zhì)量的結(jié)果,應(yīng)從取材固定開始避免引入誤差。

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