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簡要描述:甲基化檢測BSP:用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA,則未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不變。
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甲基化檢測BSP/MSP法
DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)的重要研究內(nèi)容之一,它可以抑制基困的表達(dá)。甲基化通常發(fā)生在胞嘧啶的C5位,形成5-甲基胞嘧啶(5mC),甲基化的胞密啶多位于CpG島上。DNA甲基化在人的正常發(fā)育、X染色體失活、衰老以及許多人類疾病(如發(fā)育畸形、癌癥、心血管疾病、糖尿病和神經(jīng)心理失調(diào)等)過程中發(fā)揮重要作用,已經(jīng)成為表觀遺傳學(xué)和表觀基因組學(xué)的重要研究內(nèi)容。該方法為甲基化檢測的金標(biāo)準(zhǔn),可定量檢測基因甲基化水平?;蚪MDNA經(jīng)亞硫酸氫鹽處理后,設(shè)計(jì)BSP引物擴(kuò)增目的片段,然后對PCR產(chǎn)物進(jìn)行克隆并選取10個(gè)轉(zhuǎn)化子序列,即可確定所研究的CpG區(qū)域的甲基化頻率。目前,基因的甲基化研究主要結(jié)合亞硫酸氫鈉處理和PCR技術(shù),分為甲基化特異性PCR和硫化測序PCR。
甲基化檢測BSP:甲基化的胞嘧啶在亞硫酸氫鈉發(fā)生脫氨基后不會轉(zhuǎn)變,用一對持異性引物擴(kuò)增后測序,再與DNA原始序列比對確定甲基化位點(diǎn)。測序法克服了只能針對單個(gè)位點(diǎn)檢測,并且這些位點(diǎn)必須是限制性內(nèi)切酶識別位點(diǎn)的缺點(diǎn),可以對任何基因序列的甲基化狀態(tài)進(jìn)行檢測。
實(shí)驗(yàn)服務(wù):包含DNA抽提,引物設(shè)計(jì)合成,亞硫酸鹽處理,反應(yīng)。每個(gè)反應(yīng)可以檢測50bp左右,可以特定目的區(qū)域。
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