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簡(jiǎn)要描述:RT-PCR實(shí)驗(yàn)(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。
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RT—PCR(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用,從RNA合成cDNA,再以cDNA為模板,在DNA聚合酶作用下擴(kuò)增合成目的片段。RT—PCR技術(shù)靈敏而且用途廣泛,可用于檢測(cè)細(xì)胞中基因表達(dá)水平、細(xì)胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉(zhuǎn)錄的RNA產(chǎn)物。無(wú)論使用何種RNA,關(guān)鍵是確保RNA中無(wú)RNA酶和基因組DNA的污染。用于反轉(zhuǎn)錄的引物可視實(shí)驗(yàn)的具體情況選擇隨機(jī)引物、Oligo dT及基因特異性引物中的一種。對(duì)于短的不具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的真核細(xì)胞mRNA,3種都可。
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