病理TUNEL

簡(jiǎn)要描述：病理TUNEL:基因組DNA斷裂時(shí)，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT）的催化下加上熒光素（FITC）標(biāo)記的dUTP （fluorescein-dUTP），從而可以通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè).

更新時(shí)間：2022-12-23
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細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些DNA內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組DNA。細(xì)胞凋亡時(shí)抽提DNA進(jìn)行電泳檢測(cè)，可以發(fā)現(xiàn)180-200bp的DNA ladder。基因組DNA斷裂時(shí)，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光素 (FITC) 標(biāo)記的dUTP (fluorescein-dUTP) ，從而可以通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，這就是TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling) 法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的原理。

Tunel染色

（1）脫蠟：65℃、30min；二甲苯I 10min、二甲苯II 10min ；

（2）水化：將脫蠟后的切片經(jīng)100%酒精、95%酒精、85%酒精、75%酒精、雙蒸水各3min ；

（3）消化：將玻片浸入胰蛋白酶內(nèi)消化40分鐘，PBS洗3min×3次。

（4）制備TUNEL反應(yīng)混合液。

（5）加50μl TUNEL反應(yīng)混合液于標(biāo)本上，加蓋玻片或封口膜在暗濕盒中反應(yīng)37℃反應(yīng)1h；PBS洗3min×3次。

（6）加50ul POD于標(biāo)本上，加蓋玻片或封口膜在暗濕盒中反應(yīng)37℃×30min，PBS洗3min×3次。

（7）DAB染色3-10min，自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染， 1%鹽酸酒精分化，顯微鏡下觀察，控制染色程度。

（8）脫水：75%酒精、85%酒精、95%酒精、100%酒精，逐級(jí)脫水、各3min.

（9）透明：二甲苯透明3min×2次。

（10）中性樹膠封片。

注：

以上是石蠟包埋樣本的處理方式

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