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病理油紅O染色

簡要描述:病理油紅O染色:油紅O屬于偶氮染料,是很強的脂溶劑和染脂劑,與甘油三酯結(jié)合呈小脂滴狀。脂溶性染料能溶于組織和細胞中的脂類,它在脂類中的溶解度比在溶劑中大。當組織切片置入染液時,染料則離開染液而溶于組織內(nèi)的脂質(zhì)(如脂滴)中,使組織內(nèi)的脂滴呈橘紅色。

  • 更新時間:2022-12-23
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詳細介紹

油紅O屬于偶氮染料,是很強的脂溶劑和染脂劑,與甘油三酯結(jié)合呈小脂滴狀。脂溶性染料能溶于組織和細胞中的脂類,它在脂類中的溶解度比在溶劑中大。當組織切片置入染液時,染料則離開染液而溶于組織內(nèi)的脂質(zhì)(如脂滴)中,使組織內(nèi)的脂滴呈橘紅色。

染色結(jié)果:細胞核被蘇木精染成鮮明的藍色,組織內(nèi)脂滴被染成橘紅色。

1樣本保存
1.1取材及冷凍

切取組織時應(yīng)使用鋒利的刀、剪,切取組織塊時,從刀的根部開始向后拉動切開組織。組織塊的厚度約為0.2~0.3cm,大小為1.5cm×1.5cm x 0.3cm為宜。將要切取的平面朝下放到塑料包埋盒底部,在液氮表面停留約30秒把組織凍硬,注意停留太久易使組織凍裂。立即把凍硬的組織塊裝入自封袋中保存于-80℃低溫冰箱。

1.2切片 

切片前將組織樣本置于-20℃冰箱內(nèi)復溫30 min,切片厚度在5~7 μm,太厚貼片不牢固,更不利于鏡下觀察。包埋可用OCT,也可用膠水代替。用高粘度膠水在支撐架上滴加形成一個小臺,將組織放上,在組織周圍用膠水包埋一下放在冷臺上冷凍。包埋使組織上、下方有一定的邊,有利于連續(xù)切片,而且展片時可以避免組織皺縮。待組織達適當硬度即可切片,切片時組織的冷凍程度是切片的關(guān)鍵環(huán)節(jié),凍得過硬,切片呈碎屑狀;凍得不夠,切片呈粥糜狀或切不成片。

1.3貼片和固定
載玻片必須預先處理,常用多聚賴氨酸包被。需要注意多聚賴氨酸不可反復使用,且不能用玻璃容器存放。將切片小心貼附于載玻片上,貼片時手要穩(wěn),并且手要有一個向下伸展的動作,立即將切片放入固定液中。以往的經(jīng)驗用吹風機吹干再固定,但*干后的組織容易在沖洗時脫片,并且組織細胞發(fā)生退行性變;另外,可溶性抗原不能晾干,應(yīng)立即固定。固定液的選擇因抗原而異,但一般抗原可用4℃預冷的丙酮固定15 min,此固定劑比較溫和,對抗原保存較好。
2  油紅O染色步驟

1.1.切片用4%甲醛固定10分鐘;

2.2.蒸餾水洗;

2.3.60%異丙醇浸洗;

2.4.油紅O染液10分鐘(染液可回收再利用);

2.5.60%異丙醇分色至背景無色;

2.6.蒸餾水洗;

2.7.Mayer蘇木精復染;

2.8. 自來水洗(藍化)1~3分鐘;

2.9.蒸餾水洗;

2.10.甘油明膠封片。

3 圖像采集

通過顯微鏡拍照,采集分析樣本相關(guān)部位。

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