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蛋白純化實驗

簡要描述:蛋白純化實驗要利用不同蛋白間內(nèi)在的相似性與差異,利用各種蛋白間的相似性來除去非蛋白物質(zhì)的污染,而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來。

  • 更新時間:2022-12-23
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詳細(xì)介紹

(1) 根據(jù)分子大小不同的分離方法:透析和超過濾(利用蛋白質(zhì)分子不能通過半透膜的性質(zhì));密度梯度離心(蛋白質(zhì)在介質(zhì)中離心時質(zhì)量和密度較大的顆粒沉降較快);凝膠過濾(一種柱層析)
(2) 利用溶解度差別分離:等電點沉淀法(由于蛋白質(zhì)分子在等電點時凈電荷為零,減少了分子間靜電斥力,因而容易聚集沉淀,此時溶解度?。?;鹽溶與鹽析(利用一定濃度鹽溶液增大或減小蛋白質(zhì)的溶解度)
(3) 根據(jù)電荷不同的分離方法,主要包括電泳和離子交換層析分離;
(4) 蛋白質(zhì)的選擇吸附分離(利用顆粒吸附力的強(qiáng)弱不同達(dá)到分離目的)
(5) 根據(jù)配體特性的分離——親和層析(利用蛋白質(zhì)分子與另一種稱為配體的分子能夠特異而非共價地結(jié)合這一生物性質(zhì))
(6) 低溫有機(jī)溶劑沉淀法: 用與水可混溶的有機(jī)溶劑,甲醇,乙醇或丙酮,可使多數(shù)蛋白質(zhì)溶解度降低并析出,此法分辨力比鹽析高,但蛋白質(zhì)較易變性,應(yīng)在低溫下進(jìn)行。
 

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