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簡(jiǎn)要描述:上海達(dá)為科力于臨床前藥效學(xué)CRO實(shí)驗(yàn),為廣大藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)提供保障??商峁?shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)服務(wù)。
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實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)服務(wù)介紹:
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)自誕生之日起就決定了它不僅是一種高敏感、高特異的檢測(cè)核酸分子的定性方法,而且也是一個(gè)能對(duì)核酸分子進(jìn)行定量的有力工具。1996年,美國(guó)Applied Biosystems公司推出了一種新定量試驗(yàn)技術(shù)間實(shí)時(shí)熒光定量PCR它是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤;實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程,結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析,計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度。
PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針,該探針為一寡核苷酸,兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;剛開始時(shí),探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5'端一3'端外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR樣品準(zhǔn)備條件:
細(xì)胞樣品:收集細(xì)胞后放入液氮中速凍保存或速東24h后轉(zhuǎn)入-80°C冰箱保存;收集細(xì)胞后,視細(xì)胞量,直接加入1-1.5mL Trizol溶解裂解細(xì)胞,再轉(zhuǎn)入-80°C冰箱保存。
組織樣品:動(dòng)物組織一般取材后立即放入液氮中速凍保存,液氮凍存24h后可轉(zhuǎn)入-80°C冰箱保存;組織樣品同樣可以采用Trizol溶解裂解后放入-80°C冰箱保存。特殊組織(植物等)建議采用新鮮組織即刻提取RNA,逆轉(zhuǎn)合成cDNA后-20°C保存?zhèn)溆?。所有樣品的處理和保存過程中,切總反復(fù)凍融。
樣品運(yùn)輸條件:
樣品運(yùn)輸條件根據(jù)實(shí)驗(yàn)樣品的處理?xiàng)l件,可以選擇液氮或者干冰運(yùn)輸。
科研實(shí)驗(yàn)服務(wù):
1.基因組學(xué):基因芯片、SNP檢測(cè)、DNA甲基化檢測(cè)、生物信息學(xué)分析
2.轉(zhuǎn)錄組學(xué):microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學(xué):2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測(cè):DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測(cè):Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測(cè):HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選
7.代謝組學(xué):GC-MS、LC-MS、NMR
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