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子宮內(nèi)膜異位癥動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)P?/h1>

簡(jiǎn)要描述:子宮內(nèi)膜異位癥動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)P停荷虾__(dá)為科致力于臨床前藥效學(xué)CRO實(shí)驗(yàn),多年的藥效學(xué)子宮內(nèi)膜異位癥模型的構(gòu)建,為廣大藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)提供保障??砷_(kāi)展大小鼠藥效學(xué)子宮內(nèi)膜異位癥模型的構(gòu)建。

  • 更新時(shí)間:2023-09-15
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詳細(xì)介紹

子宮內(nèi)膜異位癥模型實(shí)驗(yàn)介紹:

常用動(dòng)物:大鼠,小鼠,性成熟,8-10周齡

適應(yīng)性飼養(yǎng)后,用消毒棉拭子旋轉(zhuǎn)插入小鼠陰道內(nèi),并在陰道內(nèi)輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)幾下后取出,涂于載玻片上,用95%酒精固定30min后晾干。涂片進(jìn)行HE染色或瑞士染色,觀察動(dòng)情周期。連續(xù)觀察2周,每日定時(shí)進(jìn)行陰道涂片檢查,觀察動(dòng)情周期。選擇連續(xù)有2個(gè)或2個(gè)以上正常動(dòng)情周期(陰道涂片為大量無(wú)核角化細(xì)胞的大鼠),造模前一天每鼠肌注雌二醇0.1mg/(kg.d,大鼠),使動(dòng)物統(tǒng)一處于動(dòng)情期。

建模方法I:

大鼠:腹腔注射麻醉后,將大鼠固定,腹部剪毛,消毒,并在無(wú)菌條件下開(kāi)腹。在尿道口上約1cm處做垂直正中縱切口長(zhǎng)約2-3cm進(jìn)腹。大鼠子宮呈Y型,分離左側(cè)子宮,近端離左子宮角1cm處結(jié)扎,遠(yuǎn)端離卵巢2cm處結(jié)扎,并結(jié)扎兩端間的子宮系膜血管,切除長(zhǎng)約1.5-2.0cm的子宮段,立即放入盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中,修剪去子宮漿膜外的脂肪組織,縱向切開(kāi)子宮腔,剝?nèi){膜層及肌層,將子宮內(nèi)膜片剪成5mm×5mm大小,移植到腹壁血管豐富處,注意其內(nèi)膜面與皮下組織貼合。逐層縫合傷口,待老鼠自然蘇醒后常規(guī)飼養(yǎng)。術(shù)后每天注射,共3天。

建模4周后,開(kāi)腹檢查所有造模大鼠移植的子宮內(nèi)膜是否生長(zhǎng)。若見(jiàn)移植物體積增大,形成表面被覆結(jié)締組織并有血管形成、內(nèi)有液體積聚的透明小囊泡,則證明造模成功。

建模方法II:

小鼠:動(dòng)情期C57BL/6小鼠,脫頸椎法處死,仰臥位固定,腹部酒精消毒后,鋪上無(wú)菌治療洞巾,戴無(wú)菌手套,在恥骨聯(lián)合上方0.5cm處,沿正中線剖開(kāi)腹腔。找到Y(jié)形子宮,小心分別牽出左、右側(cè)子宮,細(xì)心分離雙側(cè)子宮系膜。離斷宮角與卵巢,在Y形子宮分叉分別剪斷左側(cè)及右側(cè)子宮,放入裝有10mL37℃生理鹽水的無(wú)菌彎盤(pán)中,反復(fù)漂洗子宮表面的血跡,進(jìn)一步分離剩余粘附的子宮系膜。將兩個(gè)子宮角分別放置于兩個(gè)無(wú)菌彎盤(pán)中,將它們直接剪成大小約1mm3的大小均等的碎片,并將它們懸浮于37℃生理鹽水中。將捐贈(zèng)鼠的子宮按1:2的比例接種于受鼠腹腔,用0.3mL生理鹽水懸浮彎盤(pán)里的組織碎片。

隨機(jī)取動(dòng)情期C57BL/6小鼠,取臍下0.5cm偏正中線0.5cm處的左下腹為進(jìn)針點(diǎn),將溶有子宮組織碎片的0.3mL生理鹽水用20號(hào)針頭連同子宮組織快碎片注入接受鼠的腹腔,后放置于鼠籠。直至第9天。隨機(jī)取動(dòng)物,處死后,取異位內(nèi)膜,進(jìn)行冰凍切片制備,HE染色觀察異位內(nèi)膜病灶是否有典型的內(nèi)膜腺體及間質(zhì),提示復(fù)制動(dòng)物模型是否成功。


分子實(shí)驗(yàn)平臺(tái):高效運(yùn)作了qRT-PCR、Western blot、雙向電泳技術(shù)、分子克隆與質(zhì)粒構(gòu)建、流式細(xì)胞儀檢測(cè)、免疫共沉淀、染色質(zhì)免疫共沉淀、RNA免疫沉淀、凝膠電泳遷移實(shí)驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定、外泌體抽提及鑒定等實(shí)驗(yàn)。


基因組學(xué)平臺(tái):可以完成甲基化檢測(cè)、基因芯片分析、高通量測(cè)序等實(shí)驗(yàn)。


蛋白組學(xué)平臺(tái):能實(shí)現(xiàn)LC-MS、ITRAQ、蛋白質(zhì)修飾分析等重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目。


病理學(xué)平臺(tái):涉及免疫熒光染色、免疫組織化學(xué)染色、HE染色、特殊染色等實(shí)驗(yàn)。


臨床前CRO服務(wù):主要提供呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)性疾病的藥效學(xué)評(píng)價(jià)服務(wù),包括靶點(diǎn)驗(yàn)證、體內(nèi)外模型的構(gòu)建、藥物篩選、藥物分析、藥效性評(píng)價(jià)、藥代

動(dòng)力學(xué)和藥理學(xué)研究以及院內(nèi)制劑研發(fā)等。


項(xiàng)目轉(zhuǎn)化服務(wù):助力客戶進(jìn)行方案設(shè)計(jì)、聯(lián)合課題申報(bào)、藥物項(xiàng)目引進(jìn)和孵化,解決客戶對(duì)實(shí)驗(yàn)技術(shù)平臺(tái)、專業(yè)人和融資的需求。



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