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簡要描述:過氧化氫誘導動物模型:動物模型是現(xiàn)代醫(yī)藥研究的重要基石,也是開展中醫(yī)藥現(xiàn)代研究的重要手段。動物模型的應用對中醫(yī)病因病機的探討、中藥療效與毒性的特點及機制研究、中醫(yī)藥理論的發(fā)展等都是至關重要的。如何建立與臨床更相似的動物模型是開展相關研究的關鍵所在。
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2.1、原理:根據(jù)黑色素不穩(wěn)定, 易受強氧化劑過氧化氫破壞的特性, 破壞皮膚黑色素, 使皮膚脫色,建立白dian風模型。
2.2、過氧化氫誘導動物模型方法:體重 200 g 左右, 花黑色豚鼠, 雌雄各半, 背部脫毛, 脫毛面積約 4 cm × 4 cm。脫毛后用生理鹽水清洗脫毛局部, 局部脫毛區(qū)均無損傷。在脫毛區(qū)涂 5% 過氧化qing溶液 1 mL, 每天2 次, 上午和下午各 1 次 ( 每次 0. 5 mL, 每次先涂0. 25 mL,10 min后再同量涂 1 次) , 連續(xù) 50 d, 可制備豚鼠白dian風模型。在此期間, 各組豚鼠每 3 d 脫毛 1 次。本模型可持續(xù) 50 -60 d。
3、莫諾苯宗乳膏脫色法制備小鼠白dian風模型
3.1、原理:通過 TYR與活性氧自由基( ROS) 的相互作用, 引起系統(tǒng)性的自身免疫反應, 并作用于黑素細胞, 從而導致色素脫失, 與職業(yè)暴露性的白dian風無明顯差異。
3.2、方法 :C57BL /6 小鼠, 雄性 ( 雌性) , 體重20 g左右, 脫去背部黑色毛, 脫毛面積約 2 cm ×2 cm, 脫毛后用生理鹽水清洗脫毛局部, 局部脫毛區(qū)均無損傷。每天用刮勺稍用力涂抹 40% 莫諾苯宗乳膏 50 mg, 每天 1 次; 連續(xù) 50 d, 可制備小鼠白dian風模型。本模型可持續(xù) 50 -65 d。
過氧化氫誘導動物模型建模指標
表觀指標:色素多少、色素面積大小、干燥脫屑情況等為白dian風的主要表觀指標, 可對這些表觀指標進行量化積分或半量化分級。白dian風動物模型制備成功后, 病變局部無色素, 皮膚呈蒼白或白斑狀, 干燥伴明顯脫屑等。表觀指標是臨床白dian風的主要診斷依據(jù), 也應是模型判定的依據(jù), 權重系數(shù) 0. 5。
病理指標:局部組織病理指標是高倍鏡下觀察含黑色素毛囊數(shù)、含黑素顆粒的細胞個數(shù) 。白dian風動物模型制備成功后局部組織形態(tài)觀察, 可見棘層明顯增厚, 角質層增生明顯; 按 Lillie 硫酸ya鐵染色法黑色素染色試劑盒說明書進行黑色素染色, 黑色素毛囊數(shù)顯著降低; 高倍鏡下隨意觀察基底細胞和棘層細胞顆粒, 可見有黑素顆粒的細胞個數(shù)顯著減少。病理指標是白dian風動物模型病理變化的直接依據(jù), 為直接相關指標, 權重系數(shù) 0. 3。
生化指標:白dian風的發(fā)生與體內血清 TYR性密切相關, 與膽jian酯酶 ( CHE) , 單 胺氧化酶( MAO) 活性, 丙二醛( MDA) , 白細胞介素-6 ( IL-6)及腫瘤壞死因子-α( TNF-α) 含量等有一定關系。白dian風動物模型制備成功后, TYR 活性明顯下降,CHE 和 MAO 活性升高, MDA, IL-6 和 TNF-α 的含量均增加。生化指標是白dian風動物模型發(fā)生、發(fā)展、康復過程的機體反映, 有一定價值, 但特異性不高, 權重系數(shù) 0.2。
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