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簡要描述:細胞實驗之成年小鼠關節(jié)軟骨細胞原代培養(yǎng):傳統(tǒng)培養(yǎng)方法體外培養(yǎng)的軟骨細胞經(jīng)長時間傳代培養(yǎng)后往往去分化為成纖維細胞,導致細胞數(shù)量及活性下降.如何避免培養(yǎng)過程中的去分化問題,是模擬體內(nèi)軟骨內(nèi)成骨軟骨發(fā)育過程的關鍵.
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細胞實驗之成年小鼠關節(jié)軟骨細胞原代培養(yǎng)步驟
原代培養(yǎng)是指直接從組織或器官中分離出細胞進行培養(yǎng)的方法,它能夠保持細胞的原始特性。
以下是根據(jù)最新信息進行細胞實驗之成年小鼠關節(jié)軟骨細胞原代培養(yǎng)的步驟:
1. 動物處死和組織采集:
1.1 使用C57小鼠,年齡在8-10周之間。通過頸椎脫位處死后,使用75%乙醇進行消毒,并在無菌條件下操作。
1.2 從小鼠體內(nèi)分離大腿腿骨,去除筋膜、肌肉和結(jié)締組織,以獲取關節(jié)軟骨組織。
2. 軟骨組織的處理:
2.1 將軟骨組織 制成小于1mm3的小塊,并使用含有2%雙抗的PBS進行清洗。
2.2 使用剪刀將軟骨帽剪成約1mm3的碎片,并加入預熱的Collagenase D進行消化。
3. 消化和細胞分離:
3.1 將含有軟骨碎片的管放入37℃、80rpm的搖床中進行消化,第一次消化時間為2小時。
3.2 消化結(jié)束后,使用含血清的培養(yǎng)基終止消化,并通過40μm細胞篩過濾,離心收集細胞。
3.3 對未消化的組織進行第二次消化,同樣使用預熱的Collagenase D,消化時間也為2小時,然后收集細胞。
4. 細胞培養(yǎng):
4.1 將收集的細胞用DMEMwanquan培養(yǎng)基重懸,計數(shù)后種植在24孔板中。
4.2 培養(yǎng)24小時后更換新鮮的wanquan培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng)。
在進行原代培養(yǎng)時,需要特別注意無菌操作,以避免細胞污染。此外,培養(yǎng)條件(如溫度、CO2濃度和培養(yǎng)基的成分)對細胞的生長和存活至關重要。在實驗
過程中,應嚴格遵守實驗室的安全規(guī)程和操作指南。
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