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簡(jiǎn)要描述:瑞士姬姆薩復(fù)合染色染大量樣品特別是切片樣品時(shí),吉姆薩染色的用途更廣。吉姆薩(Giemsa)染色法常用于血液學(xué)、脫落細(xì)胞學(xué)和病原生物學(xué)的顯微觀察。該法實(shí)際上是一種雙重染色,特點(diǎn)是堿性和酸性染色劑同時(shí)著染。
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瑞士姬姆薩復(fù)合染色原理
吉姆薩(Giemsa)染色法常用于血液學(xué)、脫落細(xì)胞學(xué)和病原生物學(xué)的顯微觀察。該法實(shí)際上是一種雙重染色,特點(diǎn)是堿性和酸性染色劑同時(shí)著染。其中,堿性染色劑主要為天青II(azure B,天青為亞甲基藍(lán)的氧化形式),酸性染色劑為伊紅Y,染色結(jié)果清晰。美中不足是染色后如果常規(guī)脫水會(huì)褪色,因此只能晾干封片。這就限制了本法在常規(guī)切片染色中的應(yīng)用。
吉姆薩固體粉劑含有天青II和伊紅Y這兩種染色劑,通常能購(gòu)買到現(xiàn)成的商品。如果沒有,可將伊紅Y與天青II按一定質(zhì)量比混合,效果相當(dāng)。
根據(jù)經(jīng)驗(yàn),染血細(xì)胞和某些脫落細(xì)胞,伊紅和天青的質(zhì)量比為15 ?4(A型);如果染一般切片的結(jié)構(gòu),伊紅與天青的質(zhì)量比為3?4(B型)。如果加入亞甲基藍(lán),伊紅、天青、亞甲基藍(lán)的質(zhì)量比為2?1?4(C型),染細(xì)胞和切片均可。有時(shí)嫌伊紅著色太淺,也可在配制染液時(shí)額外補(bǔ)充少量伊紅(配液要用甲醇;有的甲醇純度不夠,可能含有微量乙酸成分,會(huì)沉淀部分伊紅)。
吉姆薩染液一般先配制成母液儲(chǔ)存,臨用前用緩沖液稀釋成工作液。
瑞士姬姆薩復(fù)合染色注意事項(xiàng)
配制時(shí),先將吉姆薩粉劑用丙三醇少量多次研磨溶解,然后密閉于60 ℃恒溫箱2 h;加入甲醇并充分混勻后,繼續(xù)放置在37 ℃恒溫箱24 h,然后過濾即為母液。如果無明顯沉淀物,也可直接密閉保存。只要嚴(yán)格密閉、避光,母液的穩(wěn)定性良好,至少可存放5年。保存期間嚴(yán)禁吸潮,否則容易產(chǎn)生沉淀而失效。
臨用前取上述母液,用pH 6.8 ~ 7.0的緩沖液按1? 9(v/v)稀釋并過濾,即為染色工作液。工作液必須在數(shù)小時(shí)內(nèi)用完,否則很快產(chǎn)生沉淀,失去染色效力。
具體方法如下:
血液等涂片穩(wěn)固后,須用甲醇充分固定5 ~ 15 min;
→ 稍晾干,浸入吉姆薩工作液染色15 ~ 30 min(根據(jù)標(biāo)本情況預(yù)試確定時(shí)間);
→ 蒸餾水或pH 6.8 ~ 7.0的磷酸鹽緩沖液漂洗涂片1 ~ 3 min;
→ 蒸餾水快速漂洗;
→ 空氣中自然晾干玻片;
→ 滴加中性樹膠,加蓋玻片封固。
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