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實(shí)時(shí)熒光定量PCR服務(wù)

簡(jiǎn)要描述:實(shí)時(shí)熒光定量PCR服務(wù)
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative Real-time PCR,簡(jiǎn)稱(chēng)qPCR)是一種在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)進(jìn)行的同時(shí),通過(guò)熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過(guò)程的技術(shù)。這種方法允許在PCR擴(kuò)增過(guò)程中收集數(shù)據(jù),而不是在擴(kuò)增結(jié)束后進(jìn)行測(cè)定,從而實(shí)現(xiàn)了對(duì)起始模板數(shù)量的定量分析。實(shí)時(shí)熒光定量PCR廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析、病原體檢測(cè)、基因分型等領(lǐng)域。

  • 更新時(shí)間:2024-10-11
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實(shí)時(shí)熒光定量PCR服務(wù)(qPCR)概述

實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative Real-time PCR,簡(jiǎn)稱(chēng)qPCR)是一種在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)進(jìn)行的同時(shí),通過(guò)熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過(guò)程的技術(shù)。這種方法允許在PCR擴(kuò)增過(guò)程中收集數(shù)據(jù),而不是在擴(kuò)增結(jié)束后進(jìn)行測(cè)定,從而實(shí)現(xiàn)了對(duì)起始模板數(shù)量的定量分析。實(shí)時(shí)熒光定量PCR廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析、病原體檢測(cè)、基因分型等領(lǐng)域。


實(shí)時(shí)熒光定量PCR服務(wù)的原理

實(shí)時(shí)熒光定量PCR的核心在于使用熒光標(biāo)記的探針或染料,這些熒光標(biāo)記物在PCR擴(kuò)增過(guò)程中與目標(biāo)DNA或RNA結(jié)合,隨著擴(kuò)增產(chǎn)物的增多,熒光信號(hào)也隨之增強(qiáng)。通過(guò)監(jiān)測(cè)這些熒光信號(hào)的積累,可以實(shí)時(shí)跟蹤PCR反應(yīng)的進(jìn)展。在指數(shù)擴(kuò)增期,模板的起始拷貝數(shù)與循環(huán)閾值(Ct值)之間存在線性關(guān)系,這一關(guān)系被用于定量分析。


實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法

實(shí)時(shí)熒光定量PCR有兩種主要的檢測(cè)方法:

  1.SYBR Green I染料法:使用非特異性的SYBR Green I染料與所有雙鏈DNA結(jié)合,通過(guò)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)的增加來(lái)定量PCR產(chǎn)物。這種方法簡(jiǎn)單且成本較低,但需要通過(guò)熔解曲線分析來(lái)確認(rèn)擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性。

  2.TaqMan探針?lè)ǎ菏褂锰禺愋缘臒晒馓结?,探針在PCR擴(kuò)增過(guò)程中被Taq DNA聚合酶的5'→3'外切酶活性切割,釋放出熒光信號(hào)。這種方法的特異性較高,但需要合成特定序列的探針,成本相對(duì)較高。


實(shí)時(shí)熒光定量PCR的儀器和應(yīng)用

實(shí)時(shí)熒光定量PCR通常需要專(zhuān)門(mén)的儀器,如實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀,這些儀器配備了高靈敏度的光學(xué)系統(tǒng)和精確的溫控技術(shù),能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)并提供穩(wěn)定的溫度循環(huán)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的軟件還能夠自動(dòng)分析數(shù)據(jù),生成Ct值、擴(kuò)增曲線和熔解曲線等關(guān)鍵信息。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR在臨床診斷、病原體檢測(cè)、藥物療效評(píng)估、腫瘤基因檢測(cè)等多個(gè)領(lǐng)域都有重要應(yīng)用。例如,在xin冠病毒核酸檢測(cè)中,實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)被廣泛使用,因?yàn)樗哂徐`敏度高、檢測(cè)快速、污染小等優(yōu)點(diǎn)。


實(shí)時(shí)熒光定量PCR的優(yōu)勢(shì)

實(shí)時(shí)熒光定量PCR相較于傳統(tǒng)PCR具有多方面的優(yōu)勢(shì),包括:

  1.可以定量分析未知模板的數(shù)量。

  2.檢測(cè)靈敏度高,可以檢測(cè)到極少量的目標(biāo)核酸。

  3.無(wú)需進(jìn)行凝膠電泳等后續(xù)步驟,節(jié)省時(shí)間并提高效率。

  4.可以進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè),提供更多關(guān)于PCR反應(yīng)動(dòng)態(tài)的信息。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR是分子生物學(xué)和臨床診斷中bu可或缺的技術(shù)之一,隨著技術(shù)的不斷進(jìn)步,其應(yīng)用范圍和準(zhǔn)確性也在不斷提高。


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