簡要描述:Transwell小室跨膜電阻實驗簡介Transwell小室跨膜電阻(Transepithelial Electrical Resistance, TEER)實驗是一種常用于評估細胞膜完整性和細胞層滲透性的技術。TEER值能夠反映細胞膜的電阻,從而間接衡量細胞層的緊密連接程度。在體外細胞模型中,如血腦屏障(BBB)模型,TEER值是評價模型功能的重要參數(shù)。
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Transwell小室跨膜電阻實驗簡介
Transwell小室跨膜電阻(Transepithelial Electrical Resistance, TEER)實驗是一種常用于評估細胞膜完整性和細胞層滲透性的技術。TEER值能夠反映細胞膜的電阻,從而間接衡量細胞層的緊密連接程度。在體外細胞模型中,如血腦屏障(BBB)模型,TEER值是評價模型功能的重要參數(shù)。
Transwell小室跨膜電阻實驗步驟和關鍵要點
1.細胞培養(yǎng):選擇合適的細胞系進行培養(yǎng),以構建具有特定功能的細胞層,如內皮細胞或上皮細胞。
2.Transwell小室準備:使用含有透膜的Transwell小室,透膜通常由聚碳酸酯(PC)或聚四氟乙烯(PTFE)制成,孔徑大小根據(jù)實驗需求選擇。
3.細胞接種:將細胞接種到Transwell小室的上室內,使其附著并生長形成單層細胞。
4.培養(yǎng)條件優(yōu)化:確保提供適宜的培養(yǎng)條件,包括溫度、CO2濃度和培養(yǎng)基,以促進細胞的正確分化和緊密連接的形成。
5.TEER值測量:使用專門的TEER測量儀器,如EndOhm Chamber,來測量細胞層的電阻值。在測量前,確保Transwell小室和電極清潔,避免污染和損壞。
6.數(shù)據(jù)記錄和解析:記錄TEER值,并根據(jù)實驗設計進行適當?shù)臄?shù)據(jù)處理和解析。TEER值通常以Ω·cm2表示,較高的TEER值表明細胞層的屏障功能較強。
實驗技巧和常見問題解決方案
1.細胞狀態(tài)和成熟度:確保細胞達到適當?shù)姆只癄顟B(tài)和成熟度,這可能需要進行更長時間的培養(yǎng)或使用特定的培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基。
2.細胞-基質相互作用:優(yōu)化細胞與透膜的相互作用,可能需要預涂層透膜,如使用膠原蛋白或膠原蛋白類似物等。
3.培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基:提供細胞所需的適當培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基,以支持細胞生長和屏障功能的形成。
4.培養(yǎng)時間:繼續(xù)培養(yǎng)細胞并定期測量TEER,觀察其動態(tài)變化,以獲得最佳的實驗結果。
5.質量控制:確保實驗中使用的Transwell小室和測量設備的質量良好,并按照操作說明正確操作。
時效性信息
根據(jù)最新的搜索結果,有關Transwell實驗的討論和操作分享仍然是科研人員關注的話題。例如,有研究者分享了使用bEnd.3細胞構建體外BBB模型時的TEER值范圍,以及可能影響電阻值的因素和解決方案。此外,還有關于Transwell實驗操作的詳細步驟和技巧的分享,這些信息對于設計和執(zhí)行TEER實驗非常有幫助。在進行實驗時,應參考這些最新的實驗操作和討論,以確保實驗的準確性和可靠性。
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