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簡要描述:冰凍切片實驗服務冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷凍到一定硬度,然后進行切片的方法,常用于臨床快速病理診斷。
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冰凍切片實驗服務
冰凍切片是一種在低溫條件下使組織快速冷凍到一定硬度,然后進行切片的方法,常用于臨床快速病理診斷。以下是基于新信息的冰凍切片實驗服務步驟:
1.組織取材:應盡可能快地采取新鮮的材料,以防止組織發(fā)生死后變化。
2.組織速凍:將組織塊平放于軟塑瓶蓋或特制小盒內,如組織塊小可適量加OCT包埋劑浸沒組織,然后將特制小盒緩緩平放入盛有液氮的小杯內,使組織迅速冰結成塊。
3.組織固定:樣品托上涂一層OCT包埋膠,將速凍組織置于其上,4℃冰箱預冷5-10分鐘讓OCT膠浸透組織。
4.切片:將冷凍的樣品置于含OCT復合物的低溫冷箱中,采用標準的冷凍組織切片法。切片時,低溫室內溫度以-15℃至-20℃為宜,溫度過低組織易破碎。
5.切片后處理:切好室溫放置30分鐘后,入4℃丙酮固定5-10分鐘,烘箱干燥20分鐘。PBS洗5分鐘×3次。
6.染色:進行抗原熱修復,微波熱修復也可,室溫自然冷卻。可用3%H2O2孵育5-10分鐘,消除內源性過氧化物酶的活性。
7.免疫熒光染色:冰凍切片室溫晾干15分鐘,用含10%正常山羊血清的PBS室溫封閉切片1小時,滴加適當比例稀釋的一抗或一抗工作液,室溫孵育2小時或4℃過夜。第二天回收一抗,切片置于染缸內,PBS洗5分鐘×3次,滴加二抗孵育,回收二抗后進行PBS洗,滴加DAPI工作液染核,室溫10-20分鐘后封片。
8.切片保存:做好的切片放在切片盒內,置于4℃冰箱,可保存一周左右。
在進行冰凍切片實驗時,應注意組織的溫度平衡、切片機的設置、載玻片的準備以及切片后的固定和染色步驟。這些步驟的優(yōu)化有助于獲得高質量的冰凍切片,從而提高診斷的準確性.
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