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石蠟切片基本技術(shù)操作

更新時(shí)間:2021-11-26      點(diǎn)擊次數(shù):1639

石蠟切片(paraffinsection)組織學(xué)常規(guī)制片技術(shù)中最為廣泛應(yīng)用的方法。不僅用于觀察正常細(xì)胞組織的形態(tài)結(jié)構(gòu),也是病理學(xué)和法醫(yī)學(xué)等學(xué)科用以研究、觀察及判斷細(xì)胞組織的形態(tài)變化的主要方法,而且也已相當(dāng)廣泛地用于其他許多學(xué)科領(lǐng)域的研究中。教學(xué)中,光鏡下觀察切片標(biāo)本多數(shù)是石蠟切片法制備的。活的細(xì)胞或組織多為無(wú)色透明,各種組織間和細(xì)胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)之間均缺乏反差,在一般光鏡下不易清楚區(qū)別出;組織離開(kāi)機(jī)體后很快就會(huì)死亡和產(chǎn)生組壞死,失去原有正常結(jié)構(gòu),因此,組織要經(jīng)固定、石蠟包埋、切片及染色等步驟以免細(xì)胞組織死亡,而能清晰辨認(rèn)其形態(tài)結(jié)構(gòu)。
  基本技術(shù)
  說(shuō)明
  包括取材、固定、洗滌和脫水、透明、浸蠟、包埋、切片與貼片、脫蠟、染色、脫水、透明、封片等步驟。一般的組織從取材固定到封片制成玻片標(biāo)本需要數(shù)日,但標(biāo)本可以長(zhǎng)期保存使用,為顯微玻片標(biāo)本。
  取材
  應(yīng)根據(jù)要求選取材料來(lái)源及部位。例如植物細(xì)胞有絲分裂多選取洋蔥根尖,細(xì)胞分裂快又便于切取;豬的肝小葉邊界清晰明確;耳蝸以豚鼠的內(nèi)耳易于定位和剝離。材料必須新鮮,擱置時(shí)間過(guò)久則產(chǎn)生蛋白質(zhì)分解變性,導(dǎo)致細(xì)胞自溶及細(xì)菌的滋生,而不能反映組織活體時(shí)的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
  固定
  用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)藥液--固定液浸漬切成小塊的新鮮材料,迅速凝固或沉淀細(xì)胞和組織中的物質(zhì)成分、終止細(xì)胞的一切代謝過(guò)程、防止細(xì)胞自溶或組織變化,盡可能保持其活體時(shí)的結(jié)構(gòu)。固定能使組織硬化,有利于切片的進(jìn)行,而且也有媒浸作用,有利于組織著色。固定液的種類很多,其對(duì)組織的硬化收縮程度以及組織內(nèi)蛋白質(zhì)、脂肪、糖類等物質(zhì)的作用各不相同。例如純酒精可固定肝糖而能溶解脂肪,甲醛能固定一般組織,但溶解肝糖和色素。固定液可分為單一固定液及混合固定液。前者有甲醛(乙醛、福爾馬林)、酒精、醋酸或冰醋酸、重鉻酸鉀等,單一固定液不能固定細(xì)胞中的所有成分;混合固定液可以互補(bǔ)不足,常用的混合固定液有Bouin氏液、Zenker氏液、FAA液、Carnoy氏液、SuSa液(配方見(jiàn)有關(guān)技術(shù)書(shū)籍)。因此,應(yīng)根據(jù)所要顯示的內(nèi)容來(lái)選擇適宜的固定液。10%福爾馬林(4%甲醛)或10%磷酸緩沖福爾馬林是病理切片常規(guī)使用的固定液,不僅適用于常規(guī)H精-伊紅)染色,還可以用于組織學(xué)有關(guān)的其他技術(shù)的切片染色。固定液的用量通常為材料塊的20倍左右,固定時(shí)間則根據(jù)材料塊的大小及松密程度以及固定液的穿透速度而定,可以從1小時(shí)至數(shù)天,通常為1小時(shí)至24小時(shí)。
  洗滌與脫水
  固定后的組織材料需除去留在組織內(nèi)的固定液及其結(jié)晶沉淀,否則會(huì)影響后期的染色效果。該步驟稱作洗滌多
數(shù)用流水沖洗;使用酒精或酒精混合液固定的組織,則不必洗滌,可直接進(jìn)行脫水。固定后或洗滌后的組織內(nèi)充滿水分,若不除去水分則無(wú)法進(jìn)行以后的透明、浸蠟與包埋處理,原因在于透明劑多數(shù)是苯類,苯類和石蠟均不能與水相融合,水分不能脫盡,苯類無(wú)法浸入。酒精為常用脫水劑,它既能與水相混合,又能與透明劑相混。為了減少組織材料的急劇收縮,應(yīng)使用從低濃度到高濃度遞增的順序進(jìn)行,通常從30%或50%酒精開(kāi)始,經(jīng)70%、85%、95%直至純酒精(無(wú)水乙醇),每次時(shí)間為1~數(shù)小時(shí),如不能及時(shí)進(jìn)行各級(jí)脫水,材料可以放在70%酒精中保存,因高濃度酒精易使組織收縮硬化,不宜處理過(guò)久。正丁醇、叔丁醇、丙酮及二氧陸環(huán)等也可做脫水劑。

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