【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/span>
1. 學(xué)習(xí)大鼠胃潰瘍(gastric ulcer)模型建立的方法。
2. 觀察藥物對實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的防治作用。
3. 了解組織切片和HE染色方法。
【實(shí)驗(yàn)原理】
消化性潰瘍(peptic ulcer)是由多種因素引起的一種常見病。正常情況下,機(jī)體有胃黏液、胃黏膜屏障(mucosal barrier)、黏膜細(xì)胞更新以及胃、十二指腸節(jié)律性運(yùn)動(dòng)功能等一系列保護(hù)性機(jī)理,使胃、腸黏膜不受損傷。但過度的精神緊張、情緒激動(dòng),會(huì)使神經(jīng)系統(tǒng)和內(nèi)分泌功能紊亂;飲食失調(diào),如粗糙食物,骨刺等對黏膜的物理性損害;刺激性食物,如過酸、辛辣食物、酒精等;服用某些藥物,如阿司匹林、消炎痛、利血平等;不規(guī)則的進(jìn)食時(shí)間和細(xì)菌等等都可引起胃黏膜損傷和胃液分泌功能的失常。導(dǎo)致潰瘍產(chǎn)生。酒精可刺激胃酸分泌,對胃黏膜也有直接損傷作用,短期攝入大量酒精可引起胃黏膜的損傷而產(chǎn)生潰瘍。本實(shí)驗(yàn)建立酒精性胃潰瘍模型,并選用藥物進(jìn)行治療,從而分析潰瘍產(chǎn)生的機(jī)制及防治作用。
【實(shí)驗(yàn)對象】
大鼠10只(雌雄不拘,體重200~250g)。
【實(shí)驗(yàn)試劑與器材】
1. 器材 大鼠手術(shù)臺、哺乳動(dòng)物手術(shù)器械一套、注射器、塑料管等。
2. 試劑和藥品 *、氫氧化鋁凝膠(1%)、洛賽克、甲氰咪胍注射液、1%甲醛溶液、生理鹽水、切片機(jī)、HE染色液一套。
【實(shí)驗(yàn)方法與步驟】
1. 將200~250g大鼠10只(雌雄不拘)分籠飼料,禁食48h,自由飲水。
2. 手術(shù) 麻醉后將大鼠固定于手術(shù)板上,自劍突下剪開腹壁,用扁平頭的鑷子將肝臟內(nèi)側(cè)的胃拉出腹腔,用手術(shù)線在幽門和十二指腸的交界處做結(jié)扎。然后將胃放回原位,縫合腹部。將一外徑2.5mm,長10cm左右的塑料管經(jīng)口插入胃中。
3. 分組給藥 隨機(jī)將大鼠分成5組,每組2只。A組灌喂氫氧化鋁凝膠5ml/只,B組皮下注射甲氰咪胍注射液25mg/100g體重,C組灌喂洛賽克,D組灌生理鹽水為陰性對照組,E組灌生理鹽水為陽性對照組。
4. 建立潰瘍模型 除D組外,其余各組均于給藥后,接著再灌入1ml無水乙醇,取出塑料管,將大鼠放入籠內(nèi)。
5. 解剖 術(shù)后2h將大鼠用頸椎脫臼法處死。剪開腹壁縫線,結(jié)扎賁門,取出胃,沿胃大彎將胃剪開,用自來水沖洗干凈內(nèi)容物后平展于玻璃板上。
6. 切片及HE染色(方法見第二十章第五節(jié))。
【觀察項(xiàng)目】
1. 計(jì)數(shù) 用小方格(2mm×2mm)的計(jì)數(shù)板,測定實(shí)驗(yàn)組和對照組胃黏膜的總面積、潰瘍面積及潰瘍的數(shù)目。計(jì)算出每只大鼠潰瘍面積占胃黏膜總面積的百分比。將實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)入自行設(shè)計(jì)的表格中。
2. 切片觀察 觀察組織切片,并將實(shí)驗(yàn)組和對照組的組織損傷程度進(jìn)行比較。
【注意事項(xiàng)】
1. 術(shù)前饑餓是為了使大鼠排空胃內(nèi)容物,應(yīng)將大鼠關(guān)在架空的鐵絲籠中,防其吃糞粒與鋪墊物。
2. 塑料導(dǎo)管插入時(shí)一定要輕,不能用力過猛而戳破食道。
3. 用鑷子翻動(dòng)、夾取胃部時(shí),動(dòng)做要輕柔,以免器官組織受損。
4. 做手術(shù)中,為了防止大鼠清醒,可在大鼠鼻旁放少量棉球進(jìn)行麻醉。
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