免疫熒光標(biāo)記技術(shù)(immunofluorescence technique)是將已知的抗體或抗原分子標(biāo)記上熒光素,當(dāng)與其相對(duì)應(yīng)的抗原或抗體起反應(yīng)時(shí),在形成的復(fù)合物上就帶有一定量的熒光素,在熒光顯微鏡下就可以看見(jiàn)發(fā)出熒光的抗
原抗體結(jié)合部位,檢測(cè)出抗原或抗體。
實(shí)驗(yàn)材料
組織樣品
試劑、試劑盒
PBS 抗體
儀器、耗材
玻片 加濕盒
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 將濕紙巾鋪于載玻片盒底部做成加濕盒,由冰凍切片儀中取出載有切片的載玻片,放入玻片盒中(每邊放6片),或故濕盒中(載玻片勿相互接觸)。
2. 待載玻片達(dá)室濕且未干時(shí),鋪加PBS于切片上(勿溢出玻片)。
3. 稀釋的第一杭體于4℃用微量離心機(jī)以13 500 g 離心2 min(每一載玻片上加40~50 μl 抗體,應(yīng)能蓋住切片)。
4. 用與泵相連的巴斯德吸管,在切片的一端吸去玻片上的PBS,并從另一端加上抗體,蓋上加濕盒,室溫溫育1 h。
5. 以PBS冼玻片3次(5 min/次),從切片一端加入新的PBS緩沖液,由另一端吸去舊的緩沖液。
6. 稀釋的第二抗體于4℃用微量離心機(jī)以13 500 g 離心2 min(每載玻片可加40~50 μl 抗體)。
7. 將第二抗體加于切片上,置加濕盒中室溫溫育1 h,以PBS洗玻片3次(5 min/次)。
圖一、免疫組化標(biāo)記的各種方法
8. 將蓋玻片放于紙巾上,滴加1滴Gelvatol 于蓋玻片中央。翻過(guò)載玻片放于蓋玻片上(勿施壓),將玻片置工作臺(tái)上,用鋁箔覆蓋避光放置30 min,使Gelvatol 凝結(jié)。
9. 顯微鏡下觀(guān)察結(jié)果,或置玻片盒中貯于4℃。