人胰腺癌裸小鼠模型
實驗方法原理
將人胰腺癌細胞株8988 接種于裸鼠腋窩處皮下,每周測量腫瘤大小,第42d 處死小鼠。腫瘤組織及相關臟器送病理及電鏡檢查,放射免疫法檢測相關抗原。皮下腫瘤組織細胞及細胞株培養(yǎng),HE 染色。
實驗材料
裸小鼠BALB c nu-nu胰腺癌細胞株8988
試劑、試劑盒
RPMI-1640 *培養(yǎng)基胰酶戊二醛
儀器、耗材
CO2 培養(yǎng)箱試管
實驗步驟
一、實驗材料準備
裸小鼠BALB/ c nu- nu ,4~6 周齡,體重16~20 g,雌雄兼?zhèn)洌?/span>SPF 級環(huán)境中飼養(yǎng),恒溫25~27 ℃,恒濕45%~50% ,飲用水及食物均經滅菌。
二、人胰腺癌細胞株8988 體外傳代培養(yǎng)
1. 將人胰腺癌細胞株放入含10 %的RPMI-1640 *培養(yǎng)基中,置于37 ℃、5 %CO2 培養(yǎng)箱中,每2d 換液1次,2~3d,0. 25 %的胰酶消化,一傳3 傳代培養(yǎng)。
2. 待細胞布滿瓶底時,收集單細胞懸液,每只5 ×106 腫瘤細胞,0. 2ml ,注射于裸小鼠腋窩處皮下,建立腫瘤模型。
3. 每周用游標卡尺測量腫瘤大小,按公式V= π/ 6 ×長×寬×高,計算腫瘤大小,并繪制生長曲線。
三、血清學檢測
第6 周時拔眼球法處死小鼠,收集血液于試管中,靜置取血清,檢測腫瘤相關抗原及淀粉酶。
四、巨檢
1. 處死裸鼠后,皮下剝離腫瘤,記錄質地、浸潤、血供情況,觀察有無腹腔粘連,各臟器轉移狀況。
2. 將腫瘤組織、肺、肝、脾、腸系膜、十二指腸、胃、腦等取標本置于10 %的福爾馬林固定液中待用。
五、病理學檢測
上述標本常規(guī)石蠟包埋切片,HE 染色,光鏡觀察。
六、超微結構觀察
腫瘤組織2. 5 %戊二醛,1 %鋨酸雙固定,包埋,超薄切片,鈾鉛雙重染色,透射電鏡觀察。
七、鏡檢
1. 腫瘤組織細胞培養(yǎng)及活細胞觀察:取新鮮裸鼠皮下腫瘤組織,PBS 漂洗3 次,剪成1 m3 大小,0. 25 %的胰酶消化,去除粗大組織后,制成單細胞懸液,置37 ℃、5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)、生長情況等, 并與細胞株8988 進行比較。
2. 細胞HE 染色及形態(tài)學觀察:腫瘤細胞及細胞株相同量培養(yǎng)于含有蓋玻片的六孔板中, 生長至次融合后,棄培養(yǎng)基,PBS 洗3 次,2. 5 %戊二醛固定,PBS 洗3 次,HE 染色,光鏡下觀察比較。