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大鼠髓核細(xì)胞的原代培養(yǎng)總結(jié)會(huì)

更新時(shí)間:2024-04-25      點(diǎn)擊次數(shù):268

2024年4月18日,周四,公司組織,由實(shí)驗(yàn)室主管劉博主導(dǎo),實(shí)驗(yàn)室全體成員參與,對(duì)大鼠髓核細(xì)胞的原代培養(yǎng)相關(guān)知識(shí)點(diǎn),進(jìn)行了培訓(xùn)與交流。本次會(huì)議,主要針對(duì)小鼠骨髓源性巨噬細(xì)胞的種植模型,劉博就實(shí)驗(yàn)方法深入進(jìn)行了講解,實(shí)驗(yàn)室人員展開激烈的討論。以下為討論內(nèi)容的總結(jié):

 

1.脫臼法處死SD大鼠,剃毛,75%酒精浸泡5min。

2.從尾椎處剪開皮膚,取出腰椎。用含2%雙抗的PBS沖洗3-5次。

3.分離椎節(jié),切開纖維環(huán)分離凝膠狀髓核,將凝膠狀髓核置于PBS中沖洗3次,去除血跡,剪碎髓核組織呈1mm3大小,移至離心管后加入5倍體積的1.5%Ⅱ型膠原酶,37℃搖床消化2h。

4.消化結(jié)束,20%FBS終止消化,100um濾網(wǎng)過濾,1000r/min離心5min,棄上清后DMEM/F12重懸,按1×105/ml接種于培養(yǎng)板,加入含1%雙抗和 15% FBS 的 DMEM/F12,置于37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

5.4d后換液,以后每3天換液 1 次,細(xì)胞達(dá) 90% 融合后傳代。

 

本次會(huì)議,提升公司對(duì)小鼠骨髓源性巨噬細(xì)胞的種植模型的重要知識(shí)點(diǎn)的認(rèn)知,針對(duì)相關(guān)實(shí)驗(yàn),更好的把控實(shí)驗(yàn)質(zhì)量,提高了公司在這方面的經(jīng)驗(yàn)積累。


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