本次會議,主要針對人外周血內皮祖細胞分離培養(yǎng),就以下內容展開了交流:
1.血液樣本的準備:首先從健康供者或患者身上通過外周靜脈抽取血液樣本,并使用抗凝劑處理。
2.單核細胞的分離:通過密度梯度離心法,如使用Ficoll-Paque等介質,將血液樣本中的單核細胞(Peripheral Blood Mononuclear Cells, PBMCs)分離出來。
3.細胞的培養(yǎng):將分離出的PBMCs以適當?shù)募毎芏冉臃N到預先涂覆有細胞粘附因子(如纖維連接蛋白)的培養(yǎng)容器中,并使用專門的內皮細胞培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。培養(yǎng)條件通常包括適宜的溫度(37°C)、5% CO2的氣體環(huán)境和一定的濕度。
4.細胞的誘導分化:為了促進EPCs的生長和分化,通常會向培養(yǎng)基中添加多種生長因子和細胞因子,如血管內皮生長因子(VEGF)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)、表皮生長因子(EGF)和胰島素樣生長因子(IGF)等。
5.細胞的鑒定:EPCs的鑒定通?;诩毎砻鏄酥疚锏谋磉_,如CD31、CD34、CD133、KDR(血管內皮生長因子受體-2)和vWF(血管假性血友病因子)。流式細胞術和免疫熒光染色是常用的鑒定方法。
6.細胞的擴增和功能驗證:通過傳代培養(yǎng),可以擴增獲得足夠數(shù)量的EPCs。此外,還可以通過體外毛細血管形成實驗等功能性實驗來驗證EPCs的功能。
本次會議,提升公司對人外周血內皮祖細胞分離培養(yǎng)的重要知識點的認知。