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細胞實驗

簡要描述:細胞生命學在生命科學和醫(yī)學領域的重要作用日益受到國內外學術界的高度重視,已成為具有領頭效應,進展極為迅速的學科。達為科生物的細胞平臺為您提供細胞實驗的服務。

  • 更新時間:2022-12-22
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詳細介紹

細胞實驗細胞培養(yǎng)

1、取材。在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細胞(視實驗目的而定),經(jīng)過的處理(如消化分散細胞、分離等)后接入培養(yǎng)器血中,這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。

2、培養(yǎng)。將取得的組織細胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。

3、凍存及復蘇。為了保存細胞,特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株,要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃,將細胞收集至凍存管中加入含保護劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養(yǎng)基,以的冷卻速度凍存,終保存于液氮中。在極低的溫度下,細胞保存的時間是無限的。復蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37℃水中,使之在一分鐘內迅速融解。然后將細胞轉入培養(yǎng)器皿中進行培養(yǎng)。

細胞實驗原代細胞分離

凡是來源于胚胎、組織器官及外周血,經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細胞稱之為原代細胞。1懸浮細胞的分離方法組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。2實體組織材料的分離方法對于實體組織材料,由于細胞間結合緊密,為了使組織中的細胞充分分散,形成細胞懸液,可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。

細胞增殖檢測技術

目前主要有兩種用于檢測細胞增殖能力的方法。一種是直接的方法,通過直接測定進行分裂的細胞數(shù)來評價細胞的增殖能力。另一種是間接的方法,即細胞活力(cell viability)檢測方法,通過檢測樣品中健康細胞的數(shù)目來評價細胞的增殖能力。顯然,細胞活力檢測法并不能終證明檢測樣品中的細胞是否在增殖。如細胞在某一培養(yǎng)條件下會自發(fā)啟動凋亡程序,但**的干擾可抑制凋亡的發(fā)生;這時若采用細胞活力檢測法,顯然可以區(qū)分兩種條件下的細胞數(shù)量,但我們并不能從**干擾組細胞數(shù)大于對照組的事實說明**可促進細胞增殖的結論。所以直接的證據(jù)應該采用方法一。

其中常見檢測:CCK8檢測法 ,MTT檢測法,Brdu檢測法,Edu檢測法,平板克隆形成。

細胞周期檢測技術

細胞周期指由細胞分裂結束到下一次細胞分裂結束所經(jīng)歷的過程,所需的時間叫細胞周期時間。

常用的方法:流式檢測細胞周期,標記有絲分裂百分率法。

細胞凋亡檢測

常見檢測方法:流式檢測細胞凋亡,線粒體膜電位,活性氧檢測,Hoechst染色,電鏡,TUNEL。

細胞轉移能力檢測

常見檢測方法:細胞劃痕實驗,Transwell實驗,Invasion實驗

其他實驗

細胞惡性程度:軟瓊脂實驗

細胞屏障:跨膜電阻、熒光黃透過率

細胞粘附實驗

共培養(yǎng)實驗

裸鼠成瘤實驗

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