原代細胞分離純化

簡要描述：原代細胞來源于胚胎、組織器官及外周血，是經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細胞。原代細胞分離純化是細胞培養(yǎng)工作的基礎(chǔ)。

更新時間：2022-12-22
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單個細胞分離培養(yǎng)技術(shù)（細胞克隆技術(shù)），即從細胞群體中分離出一個細胞，并使其在體外培養(yǎng)體系中能繁殖成新的細胞群體，這種由單個細胞所形成的細胞群（或集落）稱為一個克隆，這種純化后的細胞群體稱為細胞株。有以下5種常采用的方法：毛細管克隆法、有限稀釋克隆法、平皿克隆分離法、軟瓊脂克隆分離法、單細胞顯微克隆法。

細胞的純化

細胞的純化分為自然純化和人工純化，主要采用以下5種方法：

1．細胞因子依賴純化法：加入某些特殊的細胞因子從而使細胞達到純化，但是此方法有依賴性，加入之后每次培養(yǎng)細胞都需要因子培養(yǎng)。

2．酶消化法：利用上皮細胞和成纖維細胞對胰蛋白酶的耐受性不同，達到純化的目的。此方法也可對貼壁細胞與半貼壁及粘附細胞間的分離純化。

（1）上皮細胞與成纖維細胞的分離純化

需要在胰蛋白酶的作用下，讓成纖維細胞先脫壁，從而得到上皮細胞。

（2）骨髓基質(zhì)肌樣細胞的純化

同樣適用酶消化法使粘附細胞脫壁分離，讓骨髓基質(zhì)細胞或血液中肌樣細胞與淋巴細胞分開和純化。

3．反復(fù)貼壁法

成纖維細胞其貼壁過程快，能在短時間內(nèi)完成附著過程，而上皮細胞在短時間內(nèi)不能附著或附著不穩(wěn)定，稍加振蕩即浮起，利用此差別可以純化細胞。

4．電烙篩選法

貼壁細胞在轉(zhuǎn)化時，細胞層中會出現(xiàn)分散的轉(zhuǎn)化灶，細胞密集、排列規(guī)則，有明顯生長趨勢，與周邊未能轉(zhuǎn)化的細胞有明顯的區(qū)域界限，可用機械刮除法去除或用電烙篩選法燙死未轉(zhuǎn)化細胞而保留轉(zhuǎn)化灶細胞。

5．機械刮除法

此方法去除不需要的細胞區(qū)域而保留需要的細胞區(qū)域，適用于上皮細胞和成纖維細胞分離純化。

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