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實(shí)時(shí)PCR實(shí)驗(yàn)

簡(jiǎn)要描述:實(shí)時(shí)PCR實(shí)驗(yàn)(real-time PCR),屬于定量PCR(Q-PCR)的一種,以一定時(shí)間內(nèi)DNA的增幅量為基礎(chǔ)進(jìn)行DNA的定量分析。定量方式包括定量和相對(duì)定量??蓹z測(cè)mRNA,microRNA,lncRNA和DNA水平的基因拷貝數(shù)變化。

  • 更新時(shí)間:2022-12-22
  • 瀏覽次數(shù):754

詳細(xì)介紹

實(shí)時(shí)PCR實(shí)驗(yàn)具體方法

1.SYBRGreen法:

在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。

SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖

PCR產(chǎn)物熔解曲線圖(單一峰圖表明PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的單一性)

2.TaqMan探針法:

探針完整時(shí),報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí),Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離,從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個(gè)熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。

二、服務(wù)流程

1、引物設(shè)計(jì)與合成
2、DNA/RNA抽提
3、反轉(zhuǎn)錄(針對(duì)RNA)
4、上機(jī)定量分析
三、客戶提供
1、全血、組織或細(xì)胞。
2、引物,或由豐核提供。
3、基因信息:目的基因名稱、物種和序列(或GenBank Accession Number)。
四、交付內(nèi)容
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:詳細(xì)操作步驟
原始數(shù)據(jù):溶解曲線圖,擴(kuò)增曲線圖,ct值

實(shí)時(shí)PCR實(shí)驗(yàn)服務(wù)列表

項(xiàng)目

備注

周期

引物設(shè)計(jì)與合成

 

3個(gè)工作日

提取

RNA提取、miRNA提取、DNA提取

2個(gè)工作日

反轉(zhuǎn)錄

 

2個(gè)工作日

qPCR反應(yīng)

SYBR Green方法,相對(duì)定量

2個(gè)工作日

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