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簡要描述:細(xì)胞活性實驗:細(xì)胞活性是進(jìn)行細(xì)胞生物學(xué)實驗的一項重要指標(biāo),是評價細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞毒性及生理研究的基礎(chǔ)。
詳細(xì)介紹
細(xì)胞活性的定義具有多樣性,通過對關(guān)鍵的細(xì)胞生理指標(biāo)進(jìn)行標(biāo)記來進(jìn)行檢測,如細(xì)胞代謝的活性(酯酶的功能,MTT法)、凋亡標(biāo)記物(Annexin V)、細(xì)胞氧化還原電位、膜電位、增值率(DNA含量)、線粒體功能和膜的完整性等。雖然有如此多的指標(biāo)參數(shù),但是基于對細(xì)胞膜的完整性和相關(guān)的染料排斥發(fā)檢測,已經(jīng)被廣泛的認(rèn)為是作為細(xì)胞活性檢測的標(biāo)準(zhǔn)。應(yīng)用*廣泛的細(xì)胞膜完整性的檢測方法是臺盼藍(lán)染色法,該法*早是基于顯微鏡下觀測并且手工計數(shù),過程費(fèi)事費(fèi)力,并且計數(shù)的系統(tǒng)誤差較大。為了排除人工計數(shù)的誤差,增加計數(shù)過程的準(zhǔn)確性,出現(xiàn)了基于儀器放大、拍照計數(shù)的方法。這樣提高了計數(shù)過程的自動化程度,但是依舊無法擺脫由于計數(shù)時焦平面的選擇、顆粒識別的準(zhǔn)確性問題,并且容易高估細(xì)胞活性。為了解決這些問題,一些熒光染料被發(fā)明進(jìn)行使用。該法能夠較臺盼藍(lán)染色提高100倍或者更高的檢測準(zhǔn)確性與靈敏度。這類型的熒光染料中,碘化丙啶(Propidium Iodidi,PI)是應(yīng)用廣泛的一種標(biāo)準(zhǔn)染料。
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