詳細介紹
MTT法是一種檢測細胞存活和生長的方法。MTT為黃色化合物,是一種接受氫離子的染料,可作用于活細胞線粒體中的呼吸鏈,在琥珀酸脫氫酶和細胞色素C的作用下,外源性MT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚( Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯免疫檢測儀在570nm(參比波長630m)波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數量。在一定細胞數范圍內,MT結晶形成的量與活細胞數成正比。
注意事項:
MTT法只能用來檢測細胞相對數和相對活力。在用酶標儀檢測結果的時候,為了保證實驗結果的線性,MTT 吸光度在0-0.7 范圍內。
MTT一般現用現配,過濾后4℃避光保存兩周內有效,或配制成5mg/ml保存在-20℃長期保存,避免反復凍融,小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。
MTT有致癌性,用的時候注意防護,配成的MTT需要無菌。
配制MTT時用PBS溶解,也有人用生理鹽水配,60℃水浴助溶。
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