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簡要描述:PCR引物合成實驗:引物合成是通過測定引物的OD值,溶解引物,終合成引物的一個完善的過程。
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目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺三酯法。亞磷酰胺三酯法合成DNA的片段,具有高效、快速的偶聯(lián)以及起始反應物比較穩(wěn)定的特點。亞磷酰胺三酯法是將DNA固定在固相載體上完成DNA鏈的合成的,合成的方向是由待合成引物的3′端向5′端合成的,相鄰的核苷酸通過3′→5′磷酸二酯鍵連接。
引物合成特點:
1.引物合成的純度高。
2.合成的序列長。
3.合成的效果好。
引物OD數(shù)的定量:
用紫外分光光度計,波長260nm,石英比色杯,光程為1厘米,測定溶液的光密度。測定時溶液的光密度稀釋到0.2-1.0之間。DNA干粉用一定體積的水充分振蕩溶解以后,用1ml水稀釋測OD值。需要根據(jù)稀釋倍數(shù)換算出母液的OD值
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