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簡(jiǎn)要描述:穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞構(gòu)建實(shí)驗(yàn):用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法或慢病毒侵染的方法將構(gòu)建好的含靶基因的載體導(dǎo)入細(xì)胞,根據(jù)不同的基因載體中所含的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物進(jìn)行篩選混合陽(yáng)性克隆。在陽(yáng)性混合克隆的基礎(chǔ)上,得到單細(xì)胞長(zhǎng)出的陽(yáng)性單克隆,繼而得到穩(wěn)轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。
詳細(xì)介紹
穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建實(shí)驗(yàn)原理:
穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株是指經(jīng)合適的藥物濃度進(jìn)行藥物篩選后,得到外源DNA穩(wěn)定整合到宿主染色體,并可以長(zhǎng)時(shí)間表達(dá)外源目的基因的細(xì)胞。穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株彌補(bǔ)了瞬時(shí)感染(或轉(zhuǎn)染)實(shí)驗(yàn)中外源基因表達(dá)時(shí)間短的缺陷,便于長(zhǎng)期觀察。穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞的篩選需根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物,常用的抗性篩選有嘌呤霉素(puromycin)、 新霉素(neomycin)等。若實(shí)驗(yàn)需求構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,我們建議通過(guò)慢病毒感染細(xì)胞進(jìn)行藥物篩選的方法,此方法較質(zhì)粒轉(zhuǎn)染可以更加有效的將外源基因整合入基因組,且整合位點(diǎn)處于轉(zhuǎn)錄相對(duì)活躍的區(qū)域,從而獲得更加高效表達(dá)外源基因的穩(wěn)轉(zhuǎn)株細(xì)胞。
穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建實(shí)驗(yàn)服務(wù)選擇:
1、穩(wěn)轉(zhuǎn)株整體服務(wù)(克隆構(gòu)建、病毒包裝穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建、檢測(cè)、單克隆細(xì)胞株篩選);
2、穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建(穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建、檢測(cè)、單克隆細(xì)胞株篩選)。
穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建檢測(cè)服務(wù)說(shuō)明
1、穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株以及陰性對(duì)照;
2、穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株鑒定結(jié)果;
3、客戶可免費(fèi)使用已有的細(xì)胞株,若庫(kù)中沒(méi)有的需要客戶提供;
4、客戶需提供代轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒,也可委托代構(gòu)建。
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