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簡要描述:裸鼠皮下成瘤模型構建:裸鼠腫瘤模型是比較常見和常用的一種腫瘤動物模型,它在皮下移植瘤腫瘤模型的建立中起到重要作用。裸鼠腫瘤模型的接種一般有細胞接種和瘤塊接種兩種方式,接種取材有手術活檢標本、癌性胸腹水標本和體外培養(yǎng)的細胞系三種。
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裸鼠皮下成瘤模型構建的基本步驟和技術要點
裸鼠皮下成瘤模型(Cell Derived Xenograft, CDX模型)的構建是一種常用的腫瘤模型,它涉及將體外培養(yǎng)的腫瘤細胞注射到裸鼠的皮下組織中,以模擬腫瘤的生長
和擴散。
以下是構建裸鼠皮下成瘤模型的關鍵步驟和技術要點:
1.動物選擇:通常選擇4-6周齡的Nude裸鼠,并在特殊病原體自由(SPF)環(huán)境中適應至少一周。
2.細胞準備:選擇適合的腫瘤細胞株,并在接種前將細胞培養(yǎng)至對數(shù)生長期,細胞密度達到80%-90%左右。使用0.25%yimei消化細胞,并用無血清培養(yǎng)基洗滌和計
數(shù),調整細胞懸液至適宜的接種濃度,通常為5×10^6個細胞/200μL。
3.接種步驟:在接種前,用75%酒精對裸鼠的注射部位進行消毒。使用1ml注射器進行皮下注射,注射深度約1cm。注射時應緩慢推進針頭,并在注射完畢后緩慢
退出針頭,以避免細胞懸液泄漏。
4.成瘤監(jiān)測:注射后通常在3天內開始肉眼觀察,并定期記錄裸鼠的體重和腫瘤的大小。腫瘤體積的計算公式為V = (長軸 × 短軸^2) / 2。
5.注意事項:確保細胞活性,接種時細胞應保持在低溫下。注射后應密切觀察裸鼠的健康狀況,以評估腫瘤的生長和藥物治療的效果。如果在預定時間內未見腫瘤
形成,可能需要檢查細胞活力、動物健康狀況或接種技術。
優(yōu)化裸鼠皮下成瘤模型構建的技巧和建議
1.選擇健康狀態(tài)良好的裸鼠進行實驗,以提高成瘤率。
2.確保使用新鮮、活力高的腫瘤細胞進行接種。
3.接種操作應迅速而準確,以減少細胞暴露在非理想環(huán)境中的時間。
4.監(jiān)控和維護適宜的飼養(yǎng)環(huán)境,以支持裸鼠和腫瘤的生長。
5.對于難以成瘤的細胞株,可以考慮使用其他免疫缺陷小鼠品系,如NOD-SCID或NOG小鼠。
通過遵循上述步驟和注意事項,可以有效地構建裸鼠皮下成瘤模型,用于腫瘤生物學研究和藥物測試。
參考:
[1]賈羅琦王超程明軍孫建, 裸大鼠人乳腺癌皮下移植瘤模型的建立和評價. 學報(醫(yī)學版), 2014. 41(05): 第685-689頁.
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