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簡要描述:DAPI單染色的基本原理和應(yīng)用DAPI(4',6-二脒基-2苯基吲哚)是一種常用的熒光染料,它可以與雙鏈DNA的AT區(qū)結(jié)合,結(jié)合后熒光增強(qiáng)約20倍。DAPI的最大激發(fā)波長為340nm,最大發(fā)射波長為488nm。由于其能夠透過完整的細(xì)胞膜,DAPI不僅可以用于固定細(xì)胞的染色,也可以用于活細(xì)胞的染色。在熒光顯微鏡下,DAPI染色通常用于觀察細(xì)胞核和檢測細(xì)胞凋亡。
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DAPI單染色的基本原理和應(yīng)用
DAPI(4',6-二脒基-2苯基吲哚)是一種常用的熒光染料,它可以與雙鏈DNA的AT區(qū)結(jié)合,結(jié)合后熒光增強(qiáng)約20倍。DAPI的最大激發(fā)波長為340nm,最大發(fā)射波長
為488nm。由于其能夠透過完整的細(xì)胞膜,DAPI不僅可以用于固定細(xì)胞的染色,也可以用于活細(xì)胞的染色。在熒光顯微鏡下,DAPI染色通常用于觀察細(xì)胞核和檢測
細(xì)胞凋亡。
DAPI單染色的實驗步驟
1.準(zhǔn)備DAPI工作液:
1.1 將DAPI儲存液用無菌三蒸水溶解,制備成1mg/ml的DAPI溶液。
1.2 使用磷酸鹽緩沖液(PBS)將DAPI溶液稀釋至所需的工作濃度,通常為0.1-0.2μg/ml。
2.細(xì)胞處理:
2.1 將培養(yǎng)的單層細(xì)胞或新鮮組織切片用PBS沖洗5分鐘,以去除培養(yǎng)基或其他雜質(zhì)。
3.染色:
將細(xì)胞或組織切片置于含有DAPI工作液的培養(yǎng)皿或染色盤中,室溫下染色5-20分鐘。染色時間可能根據(jù)細(xì)胞類型和實驗需求進(jìn)行調(diào)整。
4.清洗:
使用PBS或其他適宜的緩沖液輕輕洗滌細(xì)胞或組織切片,以去除未結(jié)合的DAPI。通常洗滌2-3次。
5.觀察:
將染色后的細(xì)胞或組織切片放置在載玻片上,用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。使用紫外光或相應(yīng)的激發(fā)濾光片(通常為340-360nm)和發(fā)射濾光片(通常為460nm)來激發(fā)DAPI并發(fā)光。
注意事項
1.在實驗過程中,應(yīng)避免長時間暴露于紫外光下,以減少熒光淬滅和細(xì)胞損傷。
2.使用DAPI染色時,應(yīng)注意保護(hù)眼睛和皮膚,因為DAPI和紫外光都可能對人體組織造成傷害。
3.實驗后應(yīng)妥善處理含有DAPI的廢棄物,避免對環(huán)境造成污染。
以上步驟和注意事項是根據(jù)最新的搜索結(jié)果和現(xiàn)有的實驗操作標(biāo)準(zhǔn)提供的。在進(jìn)行實驗時,應(yīng)嚴(yán)格遵守實驗室安全規(guī)程和試劑的使用說明。
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