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簡(jiǎn)要描述:天狼猩紅染色:偏振光鏡檢查,膠原纖維有正的單軸雙折射光的屬性,與天狼星紅復(fù)合染色液結(jié)合后,可增強(qiáng)雙折射,提高分辨率,從而區(qū)分兩型膠原纖維。
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基本原理和用途
天狼猩紅染色是一種用于組織學(xué)的染色技術(shù),它利用強(qiáng)酸性染料天狼猩紅與膠原纖維中的堿性基團(tuán)反應(yīng),使膠原纖維特異性地著染為猩紅色。這種染色方法
主要用于區(qū)分不同類型的膠原纖維,如I型和II型膠原纖維,在偏振光顯微鏡下可以進(jìn)一步區(qū)分這些膠原纖維的類型。
此染色在研究各種組織病變時(shí)對(duì)膠原纖維異?;蚶w維增生的組織中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
實(shí)驗(yàn)步驟和染色結(jié)果的解讀
脫蠟至水:將石蠟切片依次放入二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ、二甲苯Ⅲ中各5分鐘,以去除切片上的石蠟。接著,將切片依次放入無(wú)水乙醇、95%乙醇、75%乙醇中各1分鐘,最后用蒸餾水洗5分鐘。這一步驟的目的是使切片逐漸從有機(jī)溶劑過(guò)渡到水溶性環(huán)境,為后續(xù)染色做好準(zhǔn)備。
2. 鐵蘇木素染色:在切片上滴加鐵蘇木素染液,染色時(shí)間為5-10分鐘,以染出細(xì)胞核。然后用蒸餾水洗去多余的染色液,時(shí)間約為10-20秒。隨后,
用自來(lái)水洗5分鐘,以進(jìn)一步清除殘留的染色液。
3. 染色:在切片上滴加天狼猩紅染液,染色時(shí)間為15-30分鐘,以染出膠原纖維。然后,用流水稍沖洗,去除切片表面的染液。
4. 脫水透明:將切片依次放入75%乙醇、95%乙醇、無(wú)水乙醇中各1分鐘,進(jìn)行脫水處理。再將切片放入二甲苯中3次,每次1-2分鐘,以達(dá)到透明效果。
5. 封片觀察:使用中性樹膠對(duì)切片進(jìn)行封固。然后,在光學(xué)顯微鏡下觀察染色結(jié)果,膠原纖維呈紅色,細(xì)胞核呈棕褐色到黑色,肌纖維呈黃色。如有必要,可在 偏振光鏡下觀察,以區(qū)分不同類型的膠原纖維。
注意事項(xiàng)和實(shí)驗(yàn)技巧
在進(jìn)行天狼猩紅染色時(shí),需要注意kuweisuan天狼猩紅染液的使用,因?yàn)閗uweisuan具有一定的毒性,操作時(shí)應(yīng)采取適當(dāng)?shù)姆雷o(hù)措施。此外,由于染色
可能容易掉色,應(yīng)及時(shí)封片以保持染色效果。在染色過(guò)程中,染色時(shí)間可能需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行調(diào)整,以獲得最佳的染色效果。
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