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簡要描述:PI染色:碘化丙啶(PI)是一種不滲透膜的紅色熒光染料,可染色DNA。PI通常被排除在活細胞之外,并且可以穿透受損的細胞,因此通常用于鑒定細胞的活力。 PI適用于熒光顯微鏡和流式細胞儀。碘化丙啶(PI)屬于溴化乙啶相似化合物。
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基本原理和用途
PI(碘化丙啶)是一種核酸染色劑,它能夠與DNA和RNA結(jié)合并發(fā)光。PI染色通常用于區(qū)分活細胞和死細胞,因為它不能穿透完整的細胞膜,但可以染色細胞膜受損的死細胞。在流式細胞儀分析中,常被用來檢測細胞凋亡和細胞周期。凋亡細胞由于細胞膜的變化,會吸收PI并發(fā)出紅色熒光,而活細胞則不會被染色。
實驗步驟
1.樣本準(zhǔn)備:
1.1收集懸浮細胞或用yidanbaimei消化貼壁細胞以制備單細胞懸液。
1.2對于新鮮實體組織,清洗后剪碎并用酶消化,然后過濾以分離組織和細胞。
1.3石蠟切片組織需脫蠟、水化后,用酶消化以分離細胞。
2.固定:
將準(zhǔn)備好的單細胞懸液用70%乙醇固定,并在4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>
3.染色:
3.1使用RNA酶A處理固定的細胞,以消化RNA,避免其與PI結(jié)合產(chǎn)生背景信號。
3.2加入PI染液,通常包含PI和適量的Triton X-100(用于滲透細胞膜),在4℃下避光孵育30分鐘。
4.上機檢測:
使用流式細胞儀進行檢測,激發(fā)波長為488nm,記錄紅色熒光信號。
5.結(jié)果觀察:
分析PI的紅色熒光強度,以定量死亡細胞的比例。在細胞周期分析中,可以根據(jù)DNA含量的不同來區(qū)分細胞在G0/G1、S和G2/M階段。
請注意,這些步驟可能需要根據(jù)具體實驗設(shè)計和細胞類型進行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。在操作過程中,應(yīng)采取適當(dāng)?shù)陌踩胧?,因為PI是一種潛在的致癌物質(zhì).
在細胞培養(yǎng)和組織學(xué)中的應(yīng)用
在細胞培養(yǎng)中,PI染色可以用來監(jiān)測細胞毒性和藥物對細胞增殖的影響。通過染色,研究人員可以評估細胞在處理后的存活率和細胞周期的變化。在組織學(xué)中,可以用于標(biāo)記壞死細胞,幫助研究組織損傷和疾病過程中的細胞死亡。
注意事項和實驗技巧
在進行染色時,需要注意PI的毒性和潛在的致癌性,因此應(yīng)在通風(fēng)良好的環(huán)境中操作,并采取適當(dāng)?shù)姆雷o措施。此外,染色過程中應(yīng)避免光照,因為PI對光敏感,可能會降解。在流式細胞儀分析時,應(yīng)調(diào)整適當(dāng)?shù)臒晒庋a償和電壓設(shè)置,以獲得準(zhǔn)確的結(jié)果。
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