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簡要描述:蛋白組學技術(shù)服務之iTRAQiTRAQ:是一種相對和絕對定量的同位素標記技術(shù),廣泛應用于蛋白質(zhì)組學研究中。iTRAQ技術(shù)通過標記蛋白質(zhì)或肽段,實現(xiàn)蛋白質(zhì)的定量分析,從而揭示蛋白質(zhì)在生物過程中的動態(tài)變化。
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蛋白組學技術(shù)服務之iTRAQ
iTRAQ(Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation)是一種用于蛋白質(zhì)組學研究中的同位素標記技術(shù)**。這種技術(shù)使得研究者能夠同時對多達
8個不同樣本中的蛋白質(zhì)進行相對和絕對定量分析。iTRAQ技術(shù)自2004年由美國應用生物系統(tǒng)公司推出以來,已成為蛋白質(zhì)組學研究的重要工具。下面將進一步探討
iTRAQ技術(shù)的工作原理、主要特點及其在科學研究中的應用:
1. iTRAQ技術(shù)的工作原理
標簽試劑結(jié)構(gòu):iTRAQ試劑由三部分組成:報告基團、平衡基團和肽反應基團。報告基團的質(zhì)量分別為113Da、114Da、115Da、116Da、117Da、118Da、
119Da和121Da(對于8-plex試劑),平衡基團則通過不同的質(zhì)量來確保所有標記肽段在一級質(zhì)譜中具有相同的總質(zhì)量[^1^][^2^]。
一級質(zhì)譜:在不同樣本中的同一肽段被不同iTRAQ試劑標記后,由于總質(zhì)量相同,它們在一級質(zhì)譜中表現(xiàn)為一個峰。這樣可以將不同樣本中的同一肽段在質(zhì)譜圖中
合并為一個信號,簡化了后續(xù)的分析。
二級質(zhì)譜:在二級質(zhì)譜分析中,iTRAQ標簽試劑化學鍵斷裂,釋放出報告基團的信號。這些信號的強度用于定量分析,而肽段碎片離子則用于定性分析。通過比較
不同報告基團的信號強度,可以獲得不同樣本中相同肽段的相對定量信息。
2. iTRAQ的主要特點
高通量:iTRAQ技術(shù)能夠同時對多達8個樣本進行定量分析,大大提高了實驗通量。這使得研究者可以在單次實驗中比較多個條件下的蛋白質(zhì)表達差異。
高靈敏度:相比傳統(tǒng)的二維凝膠電泳,iTRAQ能夠檢測到更低豐度的蛋白,并且能準確測量較小的蛋白變化(在1.3至1.6倍之間),從而提供了更高的靈敏度。
廣泛的應用范圍:iTRAQ不僅能夠檢測胞漿蛋白,還能檢測膜蛋白、核蛋白等。無論是高分子量、酸性、還是堿性蛋白,iTRAQ技術(shù)都能有效地進行鑒定。
定性與定量同步:iTRAQ技術(shù)在一次實驗中即可完成蛋白質(zhì)的定性和定量分析,提高了實驗效率。
3. iTRAQ技術(shù)的應用
醫(yī)學研究:iTRAQ技術(shù)已廣泛應用于腫瘤標志物的篩選,通過比較腫瘤組織和正常組織的差異蛋白,研究者能夠找到潛在的診斷和治療靶標。
藥物作用機制:利用iTRAQ技術(shù),可以篩選出與藥物作用相關的蛋白,進而研究藥物的作用靶點和機制。
疾病機理研究:iTRAQ技術(shù)有助于揭示疾病的發(fā)生和進展機制,發(fā)現(xiàn)新的生物學標志物,為疾病的預防和治療提供新的思路。
綜上所述,蛋白組學技術(shù)服務之iTRAQ在蛋白質(zhì)組學研究中具有重要作用,其高通量、高靈敏度和廣泛的適用范圍使其成為研究蛋白質(zhì)表達差異的重要工具。
從醫(yī)學研究到藥物開發(fā),再到環(huán)境科學,iTRAQ技術(shù)的應用前景廣闊。研究者能夠更全面地了解蛋白質(zhì)在不同生理和病理條件下的動態(tài)變化,從而為生命科學研究和
相關應用領域帶來新的見解和機遇。
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