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簡(jiǎn)要描述:MTT實(shí)驗(yàn),全稱為3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽比色法,是一種常用于檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的體外實(shí)驗(yàn)方法。該方法基于活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠?qū)⑼庠葱訫TT還原成不溶于水的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜(Formazan),而死細(xì)胞缺乏這種功能。通過(guò)測(cè)定溶液中甲臜的光吸收值,可以間接反映活細(xì)胞的數(shù)量。
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簡(jiǎn)介
MTT實(shí)驗(yàn),全稱為3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽比色法,是一種常用于檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的體外實(shí)驗(yàn)方法。該方法基于活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能夠?qū)⑼庠葱訫TT還原成不溶于水的藍(lán)紫色結(jié)晶甲臜(Formazan),而死細(xì)胞缺乏這種功能。通過(guò)測(cè)定溶液中甲臜的光吸收值,可以間接反映活細(xì)胞的數(shù)量。MTT實(shí)驗(yàn)因其靈敏度高、經(jīng)濟(jì)實(shí)用而被廣泛應(yīng)用于生物活性因子的活性檢測(cè)、抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測(cè)定等領(lǐng)域。
實(shí)驗(yàn)步驟
1.細(xì)胞培養(yǎng):將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞接種到96孔板中,并在適宜的條件下培養(yǎng)至細(xì)胞單層鋪滿孔底。
2.藥物處理:向含有細(xì)胞的孔中加入不同濃度的測(cè)試藥物,并繼續(xù)培養(yǎng)一段時(shí)間。
3.MTT添加:向每個(gè)孔中加入MTT溶液,繼續(xù)培養(yǎng)以允許活細(xì)胞將MTT還原。
4.終止培養(yǎng):停止培養(yǎng)后,去除孔內(nèi)的培養(yǎng)液,并用二甲基亞砜(DMSO)溶解甲臜結(jié)晶。
5.比色測(cè)定:在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上測(cè)定各孔的吸光度值,通常在490nm或570nm波長(zhǎng)處進(jìn)行測(cè)量。
6.數(shù)據(jù)分析:根據(jù)吸光度值計(jì)算細(xì)胞的相對(duì)生存分?jǐn)?shù)或抑制率,并進(jìn)一步分析藥物的效力。
注意事項(xiàng)
1.MTT溶液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用,并在避光條件下保存。
2.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)避免交叉污染,并注意使用無(wú)菌技術(shù)。
3.在離心和吸液步驟中,應(yīng)輕柔操作以保護(hù)細(xì)胞。
4.溶解結(jié)晶物時(shí),應(yīng)充分振蕩以確保wanquan溶解。
5.實(shí)驗(yàn)結(jié)果的線性范圍通常建議在OD值0-0.7之間。
6.MTT法只能用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的相對(duì)數(shù)和相對(duì)活力,不能直接測(cè)定細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)。
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