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簡要描述:CCK8實驗,全稱Cell Counting Kit-8,是一種常用于細胞增殖和細胞毒性檢測的比色法。該實驗基于WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽)的還原反應。在電子耦合試劑1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓liusuan二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下,WST-8被活細胞中線粒體中的脫氫酶還原形成橙黃色的甲瓚產(chǎn)物(F
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簡介
CCK8實驗,全稱Cell Counting Kit-8,是一種常用于細胞增殖和細胞毒性檢測的比色法。該實驗基于WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽)的還原反應。在電子耦合試劑1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓liusuan二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下,WST-8被活細胞中線粒體中的脫氫酶還原形成橙黃色的甲瓚產(chǎn)物(Formazan dye)。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比,通過測定在特定波長(通常是450nm)處的吸光度(OD值),可以間接計算活細胞的數(shù)量。
CCK8實驗步驟
1.細胞接種:將細胞接種到96孔板中,并在適宜條件下培養(yǎng)至適宜密度。
2.藥物處理:向含有細胞的孔中加入不同濃度的待測物質(zhì)。
3.孵育:將培養(yǎng)板在細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間,以便藥物與細胞作用。
4.添加CCK8:向每個孔中加入CCK8溶液,繼續(xù)孵育一段時間(通常為1-4小時)。
5.檢測吸光度:使用酶標儀在450nm波長處測定各孔的吸光度值。
6.數(shù)據(jù)分析:根據(jù)吸光度值計算細胞的相對生存分數(shù)或抑制率,并進行進一步分析。
注意事項
1.實驗中應避免使用含有強還原劑的培養(yǎng)基,以免影響CCK8的檢測結(jié)果。
2.實驗前應繪制標準曲線以校準細胞數(shù)量與吸光度值之間的關(guān)系。
3.孵育時間應根據(jù)實驗具體情況調(diào)整,以確保OD值處于適宜范圍內(nèi)。
4.實驗操作應標準化,以保證結(jié)果的重復性和可比性。
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