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簡要描述:外周血分離PBMC用于細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟外周血分離PBMC(Peripheral Blood Mononuclear Cells,外周血單個(gè)核細(xì)胞)是免疫學(xué)研究中的一項(xiàng)常規(guī)技術(shù)。
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外周血分離PBMC用于細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟
外周血分離PBMC(Peripheral Blood Mononuclear Cells,外周血單個(gè)核細(xì)胞)是免疫學(xué)研究中的一項(xiàng)常規(guī)技術(shù)。
以下是基于最新信息的實(shí)驗(yàn)步驟:
1.血液采集與抗凝:首先,使用含有肝素的抗凝管采集新鮮外周靜脈血。
2.血液稀釋:按照1:1的比例將抗凝全血與稀釋洗滌液(如PBS或RPMI-1640)混合,以降低血液的粘稠度,便于后續(xù)操作。
3.密度梯度離心:向無菌離心管中加入適量的Ficoll密度梯度分離液,將稀釋后的血液樣品小心地置于分離液上方,保持兩液面界面清晰。離心條件一般為800g,室溫下離心20-30分鐘。
4.收集PBMC:離心后,血漿層位于上層,PBMC層(白色薄膜)位于中間,紅細(xì)胞層位于下層。使用移液槍或吸管小心吸取PBMC層,轉(zhuǎn)移至新的離心管中。
5.洗滌細(xì)胞:向含有PBMC的離心管中加入適量的稀釋洗滌液,低速離心去除血漿和Ficoll,重復(fù)洗滌1-2次以凈化細(xì)胞。
6.重懸細(xì)胞:洗滌后,用稀釋洗滌液重懸PBMC,計(jì)數(shù)細(xì)胞數(shù)量,并根據(jù)需要進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
外周血分離PBMC用于細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1.使用新鮮血液進(jìn)行分離,以保證細(xì)胞活性。
2.整個(gè)操作過程應(yīng)輕柔,避免對細(xì)胞造成機(jī)械性損傷。
3.離心速度和時(shí)間應(yīng)嚴(yán)格控制,以確保有效分離而不破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。
4.使用電子束滅菌的分離管和無熱源、無核酸酶的試劑,以保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和細(xì)胞的完整性。
以上步驟結(jié)合了最新的實(shí)驗(yàn)操作指南和技術(shù)建議,確保了實(shí)驗(yàn)的時(shí)效性和準(zhǔn)確性。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí),應(yīng)遵循最新的實(shí)驗(yàn)協(xié)議和安全指南。
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